資源描述:
《番茄黑斑病病原菌的鑒定及生物學(xué)特性研究》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、番茄黑斑病病原菌的鑒定及生物學(xué)特性研究 番茄黑斑病是番茄常見(jiàn)的病害之一,此病是由半知菌亞門(mén)番茄鏈格孢真菌[AlternariatomatoWeber]侵染引起的,鏈格孢菌是茄科植物中危害較大的病害之一。該病不僅發(fā)生在田間,更是采后貯藏過(guò)程中的重要病害,可侵染番茄、茄子、辣椒、馬鈴薯等茄科類蔬菜,主要通過(guò)氣孔、皮孔、傷口或表皮侵入果實(shí),在適宜的條件下產(chǎn)生大量孢子,對(duì)果實(shí)造成嚴(yán)重危害[1]。? 研究表明,鏈格孢菌所產(chǎn)生的選擇性毒素對(duì)植物有致病性,對(duì)人體健康也有一定的影響[1],所以研究鏈格孢菌的生長(zhǎng)特性,探究鏈格孢菌在不同溫度、pH值、光照、碳
2、源和氮源下的菌落長(zhǎng)勢(shì)、直徑、菌絲生長(zhǎng)速率、菌絲干質(zhì)量、產(chǎn)孢量的變化,可以探明鏈格孢菌在不同條件下的生長(zhǎng)趨勢(shì)。? 1材料與方法? 試驗(yàn)材料? PDA固體培養(yǎng)基:200g馬鈴薯,20g瓊脂,20g葡萄糖,加水補(bǔ)足1000mL。PCA固體培養(yǎng)基:g胰蛋白胨,酵母浸粉,g葡萄糖,20g瓊脂,pH值為7,加水補(bǔ)足1000mL。胡蘿卜固體培養(yǎng)基:將胡蘿卜去皮后稱取200g,20g瓊脂,加水補(bǔ)足1000mL。番茄果肉固體培養(yǎng)基:200g番茄,20g瓊脂,加水補(bǔ)足1000mL。V8果汁固體培養(yǎng)基:罐裝V8果汁200mL,20g瓊脂,加水補(bǔ)足1000mL。查
3、彼固體培養(yǎng)基:gNaNO3,1gK2HPO4,KCl,MgSO4,gFeSO4,30g蔗糖,20g瓊脂,加水補(bǔ)足1000mL。? 試驗(yàn)方法? 病原菌的分離? 根據(jù)方仲達(dá)的方法[2],對(duì)番茄發(fā)病處病原菌進(jìn)行分離,采用單孢子分離法獲得純化菌株,在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)后保存?zhèn)溆?。生物學(xué)特性研究以所獲得的純化菌株tomato為供試菌株。? 病原菌形態(tài)學(xué)鑒定? 將供試菌株在PDA培養(yǎng)基上活化,2℃恒溫培養(yǎng)d后,用無(wú)菌水制成一定濃度的孢子懸液,同時(shí)觀察菌落顏色、大小、形狀及分生孢子的形態(tài)和顏色,從而進(jìn)行病原菌的鑒定。? 生物學(xué)特性的研究? 溫度對(duì)
4、菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)的影響[3]? 用打孔器將菌體轉(zhuǎn)移至PDA培養(yǎng)基上,分別置于1、4、15、25、28、30、37、40℃的培養(yǎng)箱內(nèi),黑暗條件下培養(yǎng)d,用十字交叉法測(cè)量菌落的直徑,采用小室培養(yǎng)法,將孢子懸液滴于凹玻片上,置于以上條件下培養(yǎng)3、6、1h后,分別檢查孢子萌發(fā)率。使用棉藍(lán)乳酚油固定孢子懸液,鏡檢200個(gè)孢子,記下萌發(fā)的孢子數(shù)量,計(jì)算萌發(fā)率。每個(gè)處理3次重復(fù)?! ≈祵?duì)菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)的影響? 用1mol/L的HCl和NaOH調(diào)節(jié)PDA培養(yǎng)基的pH值和孢子懸液的pH值為3~12。分別置于2℃恒溫、黑暗條件下和小室恒溫培養(yǎng),觀察菌落直徑
5、,計(jì)算孢子萌發(fā)率。? 光照條件對(duì)菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)的影響? 將接入菌塊的PDA培養(yǎng)基和孢子懸浮液,分別在光—暗周期為1h—1h、完全光照和完全黑暗3種處理?xiàng)l件下,于2℃恒溫培養(yǎng)。觀察菌落直徑,計(jì)算孢子萌發(fā)率。? 不同培養(yǎng)基對(duì)菌株生長(zhǎng)的影響? 分別以PDA、PCA、番茄果肉固體培養(yǎng)基、V8果汁固體培養(yǎng)基和胡蘿卜固體培養(yǎng)基用打孔器將菌體轉(zhuǎn)移至固體培養(yǎng)基中心位置,置于2℃下恒溫培養(yǎng)d,用十字交叉法測(cè)量菌落的直徑。每個(gè)樣品3次重復(fù),計(jì)算平均值。? 不同碳源和氮源對(duì)菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)的影響[4]? 選取D-木糖、D-果糖、葡萄糖、乳糖、半乳糖和
6、麥芽糖等量替換查彼培養(yǎng)基中的碳源,使得各個(gè)不同碳源培養(yǎng)基中碳的含量相同;用不加碳源的培養(yǎng)基作為對(duì)照。? 選取L-谷氨酸、天冬酰胺、牛肉膏、蛋白胨、酵母膏等量替換查彼培養(yǎng)基中的氮源,使得各個(gè)不同碳源培養(yǎng)基中氮的含量相同;用不加氮源的培養(yǎng)基作為對(duì)照。? 將菌塊轉(zhuǎn)接到PDA固體平板中央,放置在2℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),3、d后用十字交叉法測(cè)量菌落的直徑,對(duì)照平行組計(jì)算出平均數(shù),每組試驗(yàn)重復(fù)3次。? 光照對(duì)菌株生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)的影響? 將菌塊轉(zhuǎn)接到PDA固體培養(yǎng)基內(nèi),分別在光—暗周期為1h—1h、完全光照和完全黑暗3種處理?xiàng)l件下,2℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng);
7、3、d后測(cè)量菌落的直徑,對(duì)照平行組計(jì)算出平均數(shù),每組試驗(yàn)重復(fù)3次。? 將制備好的孢子懸浮液滴于凹玻片上,分別在光—暗周期為1h—1h、完全光照和完全黑暗3種處理?xiàng)l件下,2聯(lián)盟℃的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),6、1h后測(cè)定孢子萌發(fā)率。? 致死溫度的確定? 吸取1mL孢子懸液至無(wú)菌試管中,分別置于40~6℃的恒溫水浴鍋中處理5~20min后迅速冷卻。將處理后的孢子懸液滴于凹玻片上,2℃小室培養(yǎng),1h后觀察孢子萌發(fā)情況,測(cè)定孢子萌發(fā)率。2結(jié)果與分析? 分離菌株的形態(tài)學(xué)觀察? 分離純化后獲得5株菌株,分別編號(hào)為tomato、tomato、tomato、t
8、omato、tomato,將這些菌株培養(yǎng)d即可長(zhǎng)滿整個(gè)培養(yǎng)皿,該菌的基本形態(tài)特征為:在PDA培養(yǎng)基上,菌落較為致密,呈絮狀平鋪生長(zhǎng),菌落