三七總皂苷對慢性腎缺血腎間質(zhì)纖維化的防治作用

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1、三七總皂苷對慢性腎缺血腎間質(zhì)纖維化的防治作用作者：謝紀(jì)青，金建生，付次雙【摘要】目的觀察三七總皂苷(PNS)對大鼠慢性腎缺血的保護(hù)作用及其機(jī)制。方法將大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組，模型組及PNS治療組。建立腎動脈狹窄腎缺血大鼠模型，分別于造模后第7，28，45，60天處死大鼠。觀察腎間質(zhì)病理形態(tài)學(xué)變化，應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測腎小管間質(zhì)αSMA在不同時間點的表達(dá)，放射免疫分析法檢測血清IL2的含量、ELISA檢測血清血小板源性生長因子(PDGF)的含量。結(jié)果模型組腎間質(zhì)纖維化的程度，腎小管上皮細(xì)胞及間質(zhì)α

2、SMA的表達(dá)和血清PDGF的含量在各時間點明顯高于假手術(shù)組(P<0.01)，PNS治療組上述各項指標(biāo)在不同時間點明顯低于模型組(P<0.05或P<0.01)。模型組血清IL2含量在7d時顯著升高(P<0.01)，之后迅速下降到假手術(shù)組水平，45d時顯著低于假手術(shù)組(P<0.05)。PNS治療組血清IL2含量在7d時低于模型組(P<0.05)，其他時間點差別無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論P(yáng)NS可能通過抑制腎小管間質(zhì)細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化，降低細(xì)胞因子PDGF的水平和早期IL2的水平

3、減輕和改善慢性腎缺血腎間質(zhì)纖維化?！娟P(guān)鍵詞】三七皂甙;慢性病;腎;缺血;間質(zhì)細(xì)胞;白細(xì)胞介素2;血小板源性生長因子;肌動蛋白類12近年來認(rèn)為“慢性腎缺血”是腎纖維化的第一個信號，缺血作為一種獨(dú)立因素導(dǎo)致腎小管間質(zhì)損傷乃至腎間質(zhì)纖維化為越來越多的學(xué)者重視[12]。在腎間質(zhì)纖維化的過程中，細(xì)胞因子如血小板源性生長因子(plateletderivedgrowthfactor,PDGF)和白細(xì)胞介素2(intreleukin，IL2)表達(dá)增加，腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化、α平滑肌肌動蛋白的表達(dá)均起了重

4、要的作用[34]。中藥三七[主要成分三七總皂苷(panaxnotoginsengsaponins，PNS)]具有多種生物學(xué)效應(yīng)。中藥及其提取物對腎小管間質(zhì)纖維化的作用近年來研究較多，效果比較肯定的是PNS。本實驗通過制備慢性腎缺血大鼠模型，應(yīng)用PNS進(jìn)行早期干預(yù)，探討細(xì)胞因子(PDGF、IL2)在慢性腎缺血中的作用及PNS對大鼠慢性腎缺血產(chǎn)生的保護(hù)作用及其可能的機(jī)制?！　?材料及方法　　1.1材料　　1.1.1實驗動物及分組雄性SD大鼠SPF級65只，體質(zhì)量180～200g[上海斯萊克實驗動物有

5、限責(zé)任公司，許可證號：SCXK(滬)20070005]。大鼠編號并按數(shù)字隨機(jī)分組，實驗分假手術(shù)組(n=21)，模型組(n=22)、PNS治療組(n=22)。分組后大鼠分籠飼養(yǎng)，自由飲水、進(jìn)食，適應(yīng)環(huán)境3d。12　　1.1.2主要藥物與試劑注射用血栓通(凍干)，主要成分為PNS(純度>80%)，購自重慶藥友制藥有限公司(批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字Z20025652)，每瓶150mg，使用前按10mg∶1mL蒸餾水配制;PDGFBB夾心法酶聯(lián)免疫吸附(enzymelinkedimmunosorbenta

6、ssay，ELISA)測定試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司(產(chǎn)品編號EK0485);兔抗大鼠αSMA抗體(產(chǎn)品編號RB9010)、即用型快速免疫組織化學(xué)MaxVisionTM試劑盒(產(chǎn)品編號KIT5004，福州邁新公司);IL2放射免疫試劑盒(產(chǎn)品編號C11PDA，北京北方生物技術(shù)研究所)。　　1.2方法　　1.2.1模型建立及標(biāo)本收集模型組和PNS治療組按照文獻(xiàn)[5]的方法建立雙側(cè)腎動脈狹窄模型。假手術(shù)組僅分離雙側(cè)腎動脈而不結(jié)扎。造模后PNS治療組每天腹腔注射1%的血栓通50mg·kg1，

7、假手術(shù)組和模型組同時給予等量生理鹽水腹腔注射。造模后第7，14，28，45天每組分別選取5只大鼠處死，取血，離心分離血清，血清儲存于-20℃冰箱中待測;處死大鼠后迅速取其左腎臟，4%甲醛固定，蘇木素伊紅染色(HE染色)、Masson染色觀察病理變化，免疫組織化學(xué)觀察腎小管間質(zhì)αSMA表達(dá)。　　1.2.2腎臟常規(guī)病理檢查行H12E染色、Masson染色，在光鏡下觀察腎組織形態(tài)學(xué)改變，間質(zhì)纖維化半定量分析方法如下：Masson染色切片，每張切片觀察10個不含腎小球和大血管的皮質(zhì)視野，呈現(xiàn)為綠色的纖

8、維區(qū)域視為陽性目標(biāo)，以陽性面積占統(tǒng)計場總面積的百分比作為腎小管間質(zhì)的纖維化指數(shù)。標(biāo)準(zhǔn)為：0分，無病變;1分：染色面積≤25%;2分：25%<染色面積≤50%;3分：染色面積≥50%[6]?！　?.2.3免疫組織化學(xué)染色檢測αSMA采用MaxVisionTM即用型快速免疫組織化學(xué)一步法檢測αSMA的表達(dá)。一抗αSMA鼠單克隆抗體(1∶25稀釋度)，嚴(yán)格按照試即用型快速免疫組化MaxVisionTM試劑盒說明書操作，光鏡下觀察陽性信號。在400倍