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《紅豆杉內(nèi)生真菌發(fā)酵培養(yǎng)過程中的碳源優(yōu)化 畢業(yè)論文》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、不同碳源對(duì)紅豆杉內(nèi)生真菌發(fā)酵培養(yǎng)條件的優(yōu)化紅豆杉內(nèi)生真菌發(fā)酵培養(yǎng)過程中的碳源優(yōu)化1緒論1.1引言腫瘤的治療在很大程度上依賴于抗腫瘤藥物，抗腫瘤藥物研究方興未艾。紫杉醇(Paclitaxel，商品名Taxol)是從紅豆杉樹皮中分離提純得到的植物抗腫瘤藥，已有40余年的研究歷史。由于其具有良好的抗癌活性和獨(dú)特的抗癌機(jī)理，因而被認(rèn)為是抗癌藥物的“明星”。自1992年以來，紫杉醇已在許多國家成為治療卵巢癌和乳腺癌的重要藥物[[1]張亞妮，董兆麟.一株產(chǎn)紫杉醇真菌發(fā)酵條件的研究，西北大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，623(3)：310～3
2、11]。由于紫杉醇的藥源植物——紅豆杉屬植物生長緩慢，紫杉醇含量很低(低于為樹皮干重的0.015%)，而現(xiàn)有的資源又有限，因而紫杉醇的供應(yīng)一開始就受到人們的關(guān)注。多年來人們一直在尋找能替代直接從植物中提取紫杉醇的方法[[2]王淑月譯紫杉醇類似物，藥學(xué)進(jìn)展，1995，19（3）：159~163、[3]王建鋒，呂華鷹，蘇文金.植物內(nèi)生真菌產(chǎn)紫杉醇的研究，微生物學(xué)通報(bào)，2000，27（1）：58~60]。紫杉醇的化學(xué)全合成雖已完成，但路線復(fù)雜，目前無商業(yè)價(jià)值；紫杉醇的半合成在一定程度上為緩解紫杉醇的供求矛盾；近年來分別從紅
3、豆杉屬（Taxus）中的短葉紅豆杉（T.brevifoliaNutt.）、云南紅豆杉（T.yunnanensis）、西藏紅豆杉（T.wallichinana）等樹皮中分離中得到能產(chǎn)生紫杉醇的內(nèi)共生真菌，這無疑為解決紫杉醇藥源危機(jī)提供了一種新的途徑。1.2內(nèi)共生真菌內(nèi)共生真菌(endophyticfungus)是一大類尚未被充分認(rèn)識(shí)的真菌，它泛指那些生活在健康植株中而不引起任何明顯病害癥狀的所有真菌。在整個(gè)真菌發(fā)展史上，內(nèi)共生真菌的研究歷史并不長[[4]郭良棟內(nèi)共生真菌研究進(jìn)展菌物系統(tǒng)2001，20(1)：148~15
4、2]。1924年，Lewis首次報(bào)道禾本科植物葉片中存在內(nèi)共生真菌，但此后的研究工作一直很少，直到近30年，對(duì)于植物內(nèi)共生真菌的研究才趨于活躍。自從A.Stierle證明Taxusbrenifolianutt中的內(nèi)共生真菌Ｔaxomycesandreanae可以產(chǎn)生紫杉醇，對(duì)于植物內(nèi)共生真菌的研究更加引人矚目[[5]孫劍秋朱紅標(biāo)周東坡等東北紅豆杉內(nèi)共生真菌分離方法的研究齊齊哈爾大學(xué)學(xué)報(bào)1999，15(3)：13~16]。目前為止，內(nèi)共生真菌生產(chǎn)紫杉醇產(chǎn)量也極低，這就需要進(jìn)行多方面的研究。本課題是以不同的碳源種類和配比
5、對(duì)紅豆杉內(nèi)共生真菌發(fā)酵培養(yǎng)條件優(yōu)化的研究。1.3本論文研究的內(nèi)容碳源在微生物中是用于合成菌體的含碳物質(zhì)及其骨架，并為微生物代謝提供能量。除自養(yǎng)菌能以CO2作為唯一碳源外，大多數(shù)微生物是以有機(jī)含碳的化合物做為碳源和能源。紅豆杉內(nèi)共真菌發(fā)酵培養(yǎng)選用的碳源一般有葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、果糖等。糖類的種類和濃度對(duì)細(xì)胞生長的影響很大，本試驗(yàn)運(yùn)用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)發(fā)酵培養(yǎng)基的碳源進(jìn)行優(yōu)化。2.材料和方法2.1.材料2.1.1試劑葡萄糖AR中國醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司麥芽糖BA上海生物化學(xué)試劑公司蔗糖AR上?；瘜W(xué)試劑有限公司9不同碳源對(duì)
6、紅豆杉內(nèi)生真菌發(fā)酵培養(yǎng)條件的優(yōu)化花生餅粉無錫第一制藥有限公司提供豆餅粉無錫第一制藥有限公司提供NH4NO3AR宜興市第二化學(xué)試劑廠瓊脂BA中國醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司蛋白胨BA中國醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司酵母浸膏BA中國醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司MgSO4AR中國竟山區(qū)塔美化工廠KH2PO4AR無錫市民豐試劑廠CHCl3AR宜興市展望化學(xué)試劑廠CH3OHHPLC上海陸都化學(xué)試劑廠精密試紙pH5.4~7.0上海三愛思試劑有限公司2.1.2培養(yǎng)基沙氏培養(yǎng)基：葡萄糖20g，麥芽糖5g，蛋白胨10g，酵母浸膏5g，瓊脂15~2
7、0g，配成1000ml，pH自然，0.1Mpa（121℃）滅菌20分鐘，即得。種子培養(yǎng)基：葡萄糖20g，花生餅粉3g，MgSO43g，KH2PO43g，NH4NO33g，配成1000ml。50ml/300ml瓶，0.1MPa（121℃）滅菌20分鐘即得。發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基：葡萄糖20g，花生餅粉10g，豆餅粉10g，MgSO43g，KH2PO43g，NH4NO33g，配成1000ml。60ml/300ml瓶，0.1Mpa（121℃）滅菌20分鐘，即得。2.1.3儀器MJ-2501AT型霉菌培養(yǎng)箱上海一恒科技有限公司MGC
8、-300H型智能型人工氣候箱上海一恒科技有限公司LDZX-40型立式壓力蒸汽滅菌器上海申安醫(yī)療器械廠超凈臺(tái)無錫市空氣凈化設(shè)備廠TDL-5-A冷凍離心機(jī)上海東亭科學(xué)儀器廠自動(dòng)高速組織勻漿機(jī)江陰市科研器械廠旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀星海生化設(shè)備有限公司2.1.4實(shí)驗(yàn)材料菌種：Y1117，本實(shí)驗(yàn)室保藏（未鑒定）標(biāo)準(zhǔn)品：Paclitaxel，購自Sigma公司3.實(shí)驗(yàn)
