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1、油茶產(chǎn)黃酮內(nèi)生真菌的發(fā)酵工藝優(yōu)化 摘要在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用正交試驗(yàn)法對油茶產(chǎn)黃酮內(nèi)生真菌的發(fā)酵條件進(jìn)行研究，結(jié)果表明，油茶產(chǎn)黃酮內(nèi)生真菌Y-UH-2的最適發(fā)酵條件為：培養(yǎng)基起始pH值為7，接種量為5%，培養(yǎng)溫度為28℃，轉(zhuǎn)速170r/min，其黃酮產(chǎn)量為3.18mg/100mL，比未優(yōu)化時(shí)高出42%?！ ￡P(guān)鍵詞黃酮產(chǎn)量；油茶；植物內(nèi)生菌；單因素優(yōu)化；正交優(yōu)化 中圖分類號(hào)S794.4文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)1007-5739（2016）20-0260-02 OptimizationofFermentationConditionsofFlavonoids-producingSt
2、rainofCamelliaoleifera ZHANGTing （CollegeofBioengineering，JingchuUniversityofTechnology，JingmenHubei448000） AbstractThefermentationconditionsofflavonoidsproducingstrainofCemelliaoleiferawerestudiedusingorthogonaltest，basedonthesinglefactorexperments.Theresultsshowedthattheoptimumfactorswere
3、asfollow：theoptimalintialpHvaluewas7，inoculationamountwas5%，theculturetemperaturewas28℃，fermentationspeedwas170r/min.Theflavonoidsyieldwas3.18mg/100mL，improvedby42%，comparedwiththeoriginalstateofstrain6Y-UH-2. Keywordsflavonoidsyield；Camelliaoleifera；endophyte；singlefactorexperments；theorthog
4、onaltest 植物內(nèi)生真菌是指在一定階段或全部階段生活于健康植物的組織和器官內(nèi)部的真菌，普遍存在于植物中[1]。由于內(nèi)生真菌長期存在于宿主植物中，與宿主植物共同進(jìn)化，能產(chǎn)生與宿主植物類似的活性物質(zhì)，目前已成為生物防治中有潛力的微生物農(nóng)藥、增產(chǎn)菌或作為潛在的生防載體菌而加以利用[2]。油茶（Camelliaoleifera），別名茶油樹、茶子樹、白花茶，常綠小喬木。油茶是我國獨(dú)有的一種食用油料木本植物。茶油色清味香，營養(yǎng)豐富，且耐貯藏，是優(yōu)質(zhì)的食用油。另外，也可作為潤滑油、防銹油用于工業(yè)。茶油中含有的不飽和脂肪酸高達(dá)90%，遠(yuǎn)高于菜油、花生油和豆油，與橄欖油相比VE含量高1倍，
5、并且含有山茶甙等特定生理活性物質(zhì)，具有相當(dāng)高的營養(yǎng)價(jià)值。茶殼還是一種很好的食用菌培養(yǎng)基[3]。研究發(fā)現(xiàn)，油茶葉中含有多種黃酮類化合物，對這些黃酮類的獲得方式主要依賴于提取[4]。本研究對前期獲得的油茶產(chǎn)黃酮內(nèi)生真菌的誘變菌株Y-UH-2進(jìn)行發(fā)酵工藝優(yōu)化，希望能為今后的工業(yè)化生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)?！ ?材料與方法 1.1材料與試劑 1.1.1菌株。以油茶產(chǎn)黃酮內(nèi)生真菌菌株的誘變菌株Y-UH-2為試驗(yàn)菌株?！ ?.1.2培養(yǎng)基。采用PDA培養(yǎng)基[5]，培養(yǎng)基配制完畢后，高壓滅菌鍋121℃，20min。6 1.1.3試劑。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)樣品購自荊州昌華試劑公司，葡萄糖、瓊脂、蛋白胨、磷酸二氫鉀、
6、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、蔗糖、氯化鈉、硝酸銨、硝酸鈉、氯化鉀、硫酸亞鐵、乙酸乙酯等均為分析純，購自武漢科普化學(xué)試劑有限公司?！ ?.2儀器與設(shè)備 SHZ-3循環(huán)水多用真空泵：上海滬西分析儀器廠有限公司；JJ-CJ-2FD型雙人單面凈化工作臺(tái)：蘇州金凈凈化設(shè)備科技有限公司；722s可見分光光度計(jì)：上海儀電分析儀器有限公司；DHWY-200B恒溫培養(yǎng)振蕩器：上海智城分析儀器制造有限公司；DH-600A電熱恒溫培養(yǎng)箱：北京科偉永興儀器有限公司；100S-11高壓滅菌鍋：上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠?！ ?.3試驗(yàn)方法 1.3.1發(fā)酵單因素優(yōu)化試驗(yàn)。參照冷桂華等[6-8]的研究文獻(xiàn)選取培
7、養(yǎng)溫度、培養(yǎng)基起始pH值、轉(zhuǎn)速和接種量這4種單因素水平，如表1所示?！ ?.3.2正交試驗(yàn)。結(jié)合單因素優(yōu)化結(jié)果，選取4個(gè)單因素的各3個(gè)水平，如表2所示，用L9（34）進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)?！ ?.3.3黃酮含量的測定。按照沈建福等[9]的方法，測定一系列濃度不同的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液的吸光值，繪制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線。再根據(jù)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出黃酮含量?！ ?結(jié)果與分析 2.1單因素試驗(yàn)結(jié)果 2.1.16培養(yǎng)溫度對發(fā)酵結(jié)果的影響。培養(yǎng)溫度對發(fā)酵條件的影響如圖1所示，溫度會(huì)影響菌株的生長繁
