幾種三聚氰胺快速檢測方法比較

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1、幾種三聚氰胺快速檢測方法比較2007年3月,美國發(fā)生多起因食用寵物食品而導致寵物中毒死亡事件。2008年9月,中國發(fā)生因食用三鹿嬰幼兒奶粉導致嬰幼兒產(chǎn)生腎結(jié)石病癥的嚴重事件。兩起事件的原因都是在食品或飼料中非法添加大劑量三聚氰胺。因此,如何快速準確的分析食品和飼料中的三聚氰胺成為食品企業(yè)、食品管理機構(gòu)和廣大消費者密切關(guān)注的問題。為科學合理地篩選快速、簡便、準確、經(jīng)濟的三聚氰胺檢測方法，中國計量院提出搭建快速檢測方法測試平臺的建議，并承擔了科技部應(yīng)急支撐項目“三聚氰胺快速檢測技術(shù)測試平臺的建設(shè)”。　　該平臺啟動以來，以權(quán)威檢測技術(shù)為支撐，以盲樣測試結(jié)果為依據(jù)，開展技術(shù)評價，在

2、國內(nèi)首創(chuàng)“統(tǒng)一現(xiàn)場測試、統(tǒng)一評價方案、統(tǒng)一判別依據(jù)、統(tǒng)一專家評審、統(tǒng)一現(xiàn)場公布測試結(jié)果”的三聚氰胺檢測方法評價模式。以國際比對互認為基礎(chǔ)，建立乳與乳制品中的三聚氰胺氣相色譜同位素稀釋質(zhì)譜法和液相色譜同位素稀釋質(zhì)譜法，為評價快速檢測方法奠定了重要的技術(shù)基礎(chǔ)?！　榇_保三聚氰胺檢測結(jié)果的有效性，全面提高檢測實驗室對原料乳及奶粉中三聚氰胺檢測能力水平，測試平臺先后組織實施了5輪全國三聚氰胺快速檢測技術(shù)方法的現(xiàn)場統(tǒng)一測試評價活動，共測試評價了56種檢測技術(shù)或方法，有效推出液相色譜法、拉曼光譜法、膠體金試免疫層析法（膠體金速測卡法）、酶聯(lián)免疫法(ELISA試劑盒法)4種三聚氰胺快速檢

3、測方法。本文對常用的三種三聚氰胺快速檢測方法：液相色譜法、酶聯(lián)免疫法和膠體金免疫層析法的原理、特點做簡單介紹并對其應(yīng)用進行比較。1.液相色譜法國家標準GB/T22400?2008公布了原料乳中三聚氰胺快速檢測的高效液相色譜法（HPLC法）,采用乙腈作為原料乳中的蛋白質(zhì)沉淀劑和三聚氰胺提取劑,0.2um微孔濾膜過濾后供HPLC測定。采用的色譜柱為強陽離子交換色譜柱,流動相為乙腈?緩沖液(10mmol/L檸檬酸,10mmol/L辛烷磺酸鈉,調(diào)節(jié)pH至3.0),采用紫外/二極管陣列檢測器檢測,定量限為0.3mg/kg,定量靈敏度提高,且分析時間較短。HPLC法雖然應(yīng)用普遍,但存在

4、一定的局限性,樣品前處理過程復雜,儀器昂貴,對檢測人員的要求高，檢測成本高。1.1原理用乙腈作為原料乳中的蛋白質(zhì)沉淀劑和三聚氰胺提取劑，強陽離子交換色譜柱分離，高效液相色譜-紫外檢測器/二極管陣列檢測器檢測，外標法定量。1.2主要試劑和材料1.2.1乙腈（CH3CN）：色譜純。1.2.2磷酸（H3PO4）。1.2.3磷酸二氫鉀（KH2PO4）。1.2.4三聚氰胺標準物質(zhì)（C3H6N6）：純度大于或等于99%。1.2.5三聚氰胺標準貯備溶液：1.00×103mg/L。1.3.儀器1.3.1液相色譜儀：配有紫外檢測器/二極管陣列檢測器。1.3.2分析天平：感量0.0001g和0

5、.01g。1.3.3pH計：測量精度±0.021.4檢驗操作：按國標GB/T22400?2008要求操作。2.酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)酶聯(lián)免疫法(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)是在免疫熒光和組織化學基礎(chǔ)上發(fā)展起來的新技術(shù)。其主要是利用抗原與抗體的高特異性反應(yīng)，通過合適的載體，使酶標抗原或抗體與待測樣品反應(yīng)，形成酶標抗原抗體復合物，在相應(yīng)的酶底物參與下，復合物上的酶催化底物使之水解成有色物質(zhì)。一定條件下，呈色物質(zhì)與待測物的含量直接相關(guān)，因此可以根據(jù)呈色物質(zhì)顏色的深淺，對待測樣品進行定性定量分析。近幾十年,國內(nèi)外已建立了數(shù)十種藥物

6、殘留的ELISA分析技術(shù),檢測水平可達ng甚至pg水平。一些發(fā)達國家已經(jīng)研制成商品化的檢測試劑盒用于快速檢測。近十多年來我國也研發(fā)出多種商品化的檢測試劑盒用于快速檢測。酶聯(lián)免疫吸附法具有特異性高、靈敏度高、穩(wěn)定性好、操作簡單、成本低，并可同時對大批量樣品進行快速檢測的特點，目前廣泛應(yīng)用于食品中獸藥、毒素檢測的初篩中。08年中國出現(xiàn)“三聚氰胺奶粉事件”時，主要使用的進口三聚氰胺速測試劑盒，現(xiàn)在國內(nèi)也已研發(fā)出商品化的三聚氰胺速測試劑盒，試劑盒靈敏度0.01ppm,最低檢測限為0.1ppm,已廣泛用于快速檢測。2.1原理采用間接競爭ELISA方法，在酶標板微孔條上預包被三聚氰胺抗

7、原，樣本殘留的三聚氰胺和微孔條上預包被的抗原競爭抗三聚氰胺抗體，加入TMB底物顯色，樣本吸光值與其殘留物三聚氰胺成負相關(guān)，與標準曲線比較再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣本中三聚氰胺的含量。2.2主要試劑、材料三聚氰胺ELISA檢測試劑盒2.3儀器2.3.1獸藥殘留分析儀或酶標儀2.3.2分析天平：感量0.01g2.4檢驗操作：按三聚氰胺ELISA檢測試劑盒說明書要求操作。3.膠體金免疫層析技術(shù)膠體金免疫層析技術(shù)（ColloidalGoldImmunochromatographicAssay，GICA)是以膠體金為