reck在宮頸癌中的表達(dá)及意義

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1、RECK在宮頸癌中的表達(dá)及意義作者：王玲韓麗英王強李荷蓮【摘要】目的檢測基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑RECK在宮頸癌組織中的表達(dá)，探討其對血管生成的影響。方法實驗組(宮頸癌組織)26例以及對照組(正常宮頸上皮、慢性宮頸炎組織)24例，應(yīng)用SP免疫組化法，經(jīng)細(xì)胞計數(shù)及灰度測量檢測RECK的表達(dá)，計數(shù)微血管密度(MVD)的值。比較二者的差異性。結(jié)果RECK的表達(dá)在實驗組的灰度值(7848.74±1276.04)明顯低于對照組(657282.8±30681.16)(P<0.05);RECK在宮頸癌中表達(dá)與肌層浸潤深度、盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，而與臨床分期、組

2、織學(xué)分型、組織學(xué)分級、脈管浸潤無關(guān)(P>0.05)。MVD值在實驗組(19.4615±3.0718)明顯高于對照組(12.0000±2.6629)(P<0.05);二者呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，r=-0.397,P=0.0495。結(jié)論RECK在宮頸癌組織中低表達(dá);REKC的高表達(dá)能抑制宮頸癌腫瘤血管生成?！娟P(guān)鍵詞】RECK;基質(zhì)金屬蛋白酶;宮頸癌;微血管密度惡性腫瘤侵襲正常組織及轉(zhuǎn)移必須突破細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)尤其是基底膜屏障。而基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)在ECM及基底膜的降解過程中起到主導(dǎo)作用，能夠促進(jìn)腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移和血管生成。MMP抑制劑作為腫瘤治療的新藥物早已引起人

3、們的重視。RECK(reversioninducing9cysteinerichproteinwithkazalmotifs)基因是近年來發(fā)現(xiàn)的新型MMP抑制劑，其轉(zhuǎn)錄后水平抑制MMP特別是MMP2、MMP9以及膜型基質(zhì)金屬蛋白酶(MT1MMP/MMP14)的表達(dá)與活性，主要抑制腫瘤的血管生成以及侵襲轉(zhuǎn)移〔1〕。國內(nèi)外學(xué)者通過對乳腺癌、結(jié)腸癌、前列腺癌等組織的體外實驗研究表明：在惡性腫瘤組織中，RECK的表達(dá)顯著降低，并與腫瘤及淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān);但對RECK與腫瘤的分期及分化程度關(guān)系意見不一致〔2，3〕。本實驗主要探討RECK在宮頸癌中的表達(dá)情況，及與宮頸癌發(fā)展、侵

4、襲及轉(zhuǎn)移的關(guān)系以及對血管生成的作用，為宮頸癌的基因靶向治療建立一個新的起點?！　?資料與方法　　1.1標(biāo)本來源選擇2007年3月～2008年3月在吉林大學(xué)第二醫(yī)院、吉林大學(xué)第一院、長春市婦產(chǎn)醫(yī)院、省腫瘤醫(yī)院進(jìn)行手術(shù)治療的50例患者的宮頸組織。分為試驗組及對照組。試驗組26例：經(jīng)病理組織證實為宮頸癌，術(shù)前患者均未行放療、化療和免疫治療，年齡33～72歲，平均年齡(48±6.52)歲。其中Ⅰ期19例，Ⅱa期4例，Ⅱb期2例，Ⅲa期經(jīng)2個療程化療后1例;高分化9例，中分化13例，低分化4例;鱗癌21例，腺癌4例，腺鱗癌1例;盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移2例;脈管轉(zhuǎn)移2例。對照組24例，包括

5、癌旁組織16例、慢性宮頸炎8例。兩組在年齡上無統(tǒng)計學(xué)差異。9　　1.2試劑鼠抗人RECK蛋白多克隆抗體購自美國SantaCruz生物制品公司，鼠抗人Ⅷ因子單克隆抗體購自福州邁新生物技術(shù)有限公司，其他試劑采用進(jìn)口或國產(chǎn)分析純試劑?！　?.3方法　　1.3.1標(biāo)本采集廣泛性子宮切除或全子宮切除標(biāo)本，立即用4℃預(yù)冷雙刃刀片從宮頸組織上切取1cm3大小組織，投入10%甲醛溶液中，4℃保存，供制備光鏡標(biāo)本用。組織經(jīng)固定、脫水、包埋、5μm連續(xù)切片?！　?.3.2實驗方法將切片進(jìn)行HE染色和SP免疫組化。用Imageproplus6.0做灰度分析(IOD)，半定量計量RECK陽

6、性率及IOD值，計數(shù)MVD值?！　?.3.3結(jié)果判定①RECK細(xì)胞計數(shù)判斷標(biāo)準(zhǔn)：400倍鏡下觀察，在腫瘤細(xì)胞膜和/或細(xì)胞質(zhì)有黃棕色或玫瑰紅色顆粒沉著為RECK陽性染色。根據(jù)染色程度和染色細(xì)胞百分率進(jìn)行評分：基本不著色為0分，淡為1分，適中為2分，深為3分;著色細(xì)胞占計數(shù)細(xì)胞百分率≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，≥51%為3分。將平均著色程度得分與平均著色細(xì)胞百分率得分相乘為其最后得分：≤1分為陰性(-)，2～3分為(+)，4～6分為()，>6分為()。②9MVD計數(shù)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞間質(zhì)內(nèi)孤立的棕黃色血管內(nèi)皮細(xì)胞或細(xì)胞簇或血管腔內(nèi)徑小于

7、8個紅細(xì)胞直徑且管壁無肌層者代表1條單獨的微血管。先在低倍(×100)視野下找到腫瘤組織內(nèi)微血管密度最高的區(qū)域(熱點)，然后在高倍(×400)視野下計數(shù)5個視野的微血管數(shù)，取其平均值。　　1.4統(tǒng)計學(xué)方法使用SPSS11.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，RECK檢測結(jié)果細(xì)胞計數(shù)以(-～)表示，灰度分析以IOD均值及標(biāo)準(zhǔn)差表示，MVD結(jié)果以均值及標(biāo)準(zhǔn)差表示。組間進(jìn)行獨立樣本χ2檢驗、t檢驗及雙變量相關(guān)性分析。　　2結(jié)果　　2.1宮頸癌組織及對照組中RECK的表達(dá)RECK在胞漿和胞膜處表達(dá)明顯，宮頸間質(zhì)中有適度表達(dá)，呈廣泛性彌漫(見圖1)。RECK在宮頸癌