二十二碳六烯酸和二十碳五烯酸對(duì)對(duì)模擬失重大鼠紅細(xì)胞膜流動(dòng)性的影響

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1、二十二碳六烯酸和二十碳五烯酸對(duì)對(duì)模擬失重大鼠紅細(xì)胞膜流動(dòng)性的影響作者：郭凱,胡華碧,陳琳,魏冀,馬慧【摘要】目的:研究二十二碳六烯酸(DHA)、二十碳五烯酸(EPA)對(duì)模擬失重大鼠紅細(xì)胞膜流動(dòng)性的影響。方法:將30只健康SD大鼠隨機(jī)分為地面對(duì)照組(Ⅰ)、懸吊對(duì)照組(Ⅱ)和懸吊實(shí)驗(yàn)組(Ⅲ)。懸吊實(shí)驗(yàn)組鼠料中添加DHA、EPA,其他2組為普通鼠料。懸掛40d后利用激光衍射法測(cè)定紅細(xì)胞變形指數(shù)、取向指數(shù),熒光偏振法測(cè)定紅細(xì)胞膜流動(dòng)性,硫代巴比妥酸熒光法測(cè)定紅細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化物(LP0),激光共聚焦顯微鏡觀測(cè)紅細(xì)胞纖維型肌動(dòng)蛋白的改變及含量。結(jié)果:失重下大鼠紅細(xì)胞的變形指數(shù)、取向指數(shù)以及

2、紅細(xì)胞膜的流動(dòng)性明顯降低(P<0.05),LPO增加,紅細(xì)胞形態(tài)和骨架發(fā)生改變,Factin含量明顯降低(P<0.05)。結(jié)論:在模擬失重條件下,紅細(xì)胞膜流動(dòng)性降低,DHA、EPA可拮抗損傷作用,對(duì)紅細(xì)胞膜具有較強(qiáng)的保護(hù)作用?！娟P(guān)鍵詞】二十二碳六烯酸;二十碳五烯酸;模擬失重;紅細(xì)胞膜;膜流動(dòng)性二十二碳六烯酸(DHA)、二十碳五烯酸(EPA)是n3多不飽和脂肪酸,對(duì)于穩(wěn)定細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能、提高機(jī)體抗氧化能力有著十分重要的意義[1]。研究證明,9自由基可通過脂質(zhì)過氧化引起生物膜質(zhì)分子結(jié)構(gòu)改變,使生物膜流動(dòng)性下降[2]。我們通過觀察失重條件下大鼠紅細(xì)胞膜流動(dòng)性的改變,

3、探討DHA、EPA對(duì)細(xì)胞膜流動(dòng)性的影響,證實(shí)多不飽和脂肪酸是否對(duì)微重力條件下的機(jī)體代謝有影響?！　?材料和方法　　1.1材料雄性SD大鼠30只,體質(zhì)量(160.6±9.8)g。購于貴陽醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。DHA、EPA膠囊由威海達(dá)因海洋生物制藥有限公司提供,含量為450mg/粒,含DHA、EPA70%。每斤普通鼠料中加3粒DHA、EPA膠囊。所有動(dòng)物均飲普通自來水。LBYBX2型激光衍射儀(北京普利生儀器中心);Hitachi850型熒光分光光度計(jì)(日本日立公司);激光掃描共聚焦顯微鏡(德國Leika公司);GL16G高速離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)。1,5二苯基1,3,

4、5己三烯(DPH,Fluka公司);硫代巴比妥酸(德國Merk公司);羅丹明標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽(MolecularProbes公司);TritonX100(美國Sigma公司);聚乙烯吡咯烷酮K30(PVP,MW=30kD,德國進(jìn)口分裝);150g/LPVP溶液(PVP15g,Na2HPO4284mg,KH2PO468mg,NaCl0.38g,溶于100mL蒸餾水中,用100mL/LNaOH調(diào)pH值至7.4,黏度為15map·s,300mOsm)。30g/LPVP溶液(150g/LPVP溶液與等滲PBS溶液1∶4混合,黏度1.02map·s)?！　?.2方法9　　1.2.1動(dòng)物分

5、組將以上動(dòng)物隨機(jī)分為3組,每組10只:I組為地面正常對(duì)照組;Ⅱ組為懸吊對(duì)照組;Ⅲ組為懸吊實(shí)驗(yàn)組。采用尾部懸吊法模擬失重,大鼠后肢離地,軀干與地面成30°夾角,前肢可自由活動(dòng)。懸吊時(shí)間為40d。對(duì)照組飼正常鼠料,實(shí)驗(yàn)組鼠料加DHA,EPA?！　?.2.2血液流變學(xué)指標(biāo)測(cè)定取全血20μL加入2.5mL150g/LPVP溶液中,用傳統(tǒng)激光衍射法[3]在剪切率為50～1000s-1下,利用LBYN6A型紅細(xì)胞變形聚集儀測(cè)紅細(xì)胞的變形指數(shù)(deformationindex,DI)和積分變形指數(shù)(integratedformationindex,IDI);取全血12.5μL加入2.5mL3

6、0g/LPVP溶液中,用新型激光衍射法[3]在剪切率為50～150s-1下,用LBYBX2型激光衍射儀測(cè)紅細(xì)胞的取向指數(shù)(orientationindex,OI)?！　?.2.3紅細(xì)胞膜流動(dòng)性測(cè)定取血后,肝素抗凝,離心,取沉淀部分用低滲Tris緩沖液(10mmol/L,pH7.4)破膜40min,25000r/min4℃離心40min去上清,用低滲Tris在上述離心條件下反復(fù)清洗沉淀物數(shù)遍,直至變?yōu)槿榘咨?再用90g/LNaCl于4℃,50000r/min離心60min,清洗沉淀物,去除上清后,得到紅細(xì)胞血影。DPH溶解在四氫呋喃中配制成2×10-3mol/L儲(chǔ)存液,實(shí)驗(yàn)前用p

7、H7.4,0.01mol/LPBS稀釋成2×10-6mol/L應(yīng)用液,取已制備好的樣品19mL(蛋白含量0.3～0.6g/L)加入3mLDPH應(yīng)用液,混勻,25℃溫育30min,3000r/min,離心10min,用PBS洗1次,最后懸浮于4mLPBS中待測(cè)。熒光分光光度計(jì)光源150W氫燈、狹縫10nm、激發(fā)波長359nm、發(fā)射波長430nm,在25℃下分別測(cè)定與激發(fā)光、偏振光振動(dòng)方向平行、垂直時(shí)的熒光偏振強(qiáng)度,然后按文獻(xiàn)[4]中公式計(jì)算出P值。再應(yīng)用Einstein硬粒子溶液粘