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《制藥工程基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、實(shí)驗(yàn)一、培養(yǎng)基的配置與微生物的接種培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模和ㄟ^(guò)實(shí)驗(yàn)，使學(xué)生了解和掌握培養(yǎng)基的配置、消毒方法和接種與培養(yǎng)技術(shù)。了解微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求，不同微生物的生長(zhǎng)差異。（二）實(shí)驗(yàn)原理：微生物必須在含有所需要的營(yíng)養(yǎng)元素的培養(yǎng)基上才能生長(zhǎng)，不同種類的微生物有它所適宜生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，細(xì)菌和真菌的培養(yǎng)基不同，在長(zhǎng)期的實(shí)踐中形成了有些著名的培養(yǎng)基配方和配置方法。微生物的培養(yǎng)過(guò)程中要防止其他微生物的存在和生長(zhǎng)，因此在接種和培養(yǎng)過(guò)程中要進(jìn)行滅菌和消毒，防止雜菌的干擾。滅菌方式中廣泛使用的是蒸汽滅菌，即濕熱滅菌。是熱滅菌的好處是滅菌效果好，因蛋白質(zhì)在含水時(shí)易變性，另外蒸汽穿
2、透力大，含能量高。使用蒸汽滅菌器要注意排氣完全，否則達(dá)不到滅菌溫度。表1表示排空氣程度與實(shí)際溫度的關(guān)系。表1蒸汽滅菌其中空氣排除程度與器內(nèi)溫度的關(guān)系空氣排除程度表壓力（kPa）滅菌器內(nèi)的實(shí)際溫度（℃）完全排除98.07121排除2/398.07115排除1/398.07112排除1/398.07109完全未排除98.07100蒸汽滅菌器的壓力有的以1b/in2（磅/英寸2）、kg/cm2表示，現(xiàn)統(tǒng)一以帕（Pa）或千帕（kPa）表示，它們與溫度的關(guān)系如表4-2。表2蒸汽壓力與溫度的關(guān)系蒸汽壓力相應(yīng)溫度（℃）kPaLb/in2Kg/cm234.4750.352107
3、.768.95100.703115.5103.42151.055121.6137.90201.406126.6172.37251.756130.5206.84302.109134.4表3糖在不同溫度下熱滅菌的破壞情況分析方法糖名（10%糖液）滅菌方法103.42kPa(121℃)68.95~82.74kPa(115.6~118℃)55.16~68.95kPa(113~115.6℃)100℃15min20min20min30min含量%破壞%含量%破壞%含量%破壞%含量%破壞%旋光法葡萄糖乳糖麥芽糖蔗糖76.067.994.087.724.032.116.012.
4、381.885.784.797.718.214.315.32.399.495.386.598.70.61.4.72.13.53.1.392.081.978.896.38.018.121.23.7表4一些微生物殺死的溫度與時(shí)間微生物熱死時(shí)間微生物熱死時(shí)間12溫度℃時(shí)間min溫度℃時(shí)間min脆弱假單胞菌氯針假單胞菌熒光假單胞菌賽氏桿菌（低溫性）海產(chǎn)弧菌（低溫性）鼠傷寒沙門(mén)氏菌506053302555351025308010*傷寒沙門(mén)氏菌桑夫頓伯格沙門(mén)氏菌金黃色葡萄球菌大腸桿菌結(jié)核桿菌產(chǎn)氣腸細(xì)菌60636061475056*75~303060*指活菌數(shù)減少一個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)即
5、90%被殺死所需的時(shí)間。蒸汽滅菌適用范圍很廣，但主要是培養(yǎng)基的滅菌。在培養(yǎng)基滅菌中最需注意不要過(guò)多破壞營(yíng)養(yǎng)，特別是糖類。糖類在濕熱滅菌時(shí)破壞情況見(jiàn)表3。（三）實(shí)驗(yàn)材料1.大腸桿菌、紅豆杉內(nèi)生真菌。2.生化培養(yǎng)箱。3.超靜工作臺(tái)3.接種環(huán)或無(wú)菌牙簽。4.酒精燈。5.無(wú)菌培養(yǎng)皿。6.肉湯培養(yǎng)基牛肉膏0.5g水100ml蛋白胨1.0gPH7.2NaCl0.5g加入1.2％瓊脂，即為固體完全培養(yǎng)基（CM）。7.PDA培養(yǎng)基：PDA）：馬鈴薯煮汁100毫升蔗糖2克瓊脂1.5克PH值5.5～6.0????制法：先將新鮮無(wú)病害的馬鈴薯洗凈，去皮后切成小薄片，稱20克，加水10
6、0毫升，煮沸20分鐘后過(guò)濾，其濾汁為馬鈴薯煮汁。然后加瓊脂和蔗糖煮溶，后補(bǔ)足水分至100毫升，裝培養(yǎng)皿滅菌備用。（四）操作步驟1按上述要求配置2種培養(yǎng)基，分別裝入培養(yǎng)皿；2放入高壓鍋中蒸汽滅菌20min。3待培養(yǎng)基冷卻凝固后，在兩種培養(yǎng)基上分別接種大腸桿菌和紅豆杉內(nèi)生真菌。37℃培養(yǎng)。42天后檢查生長(zhǎng)情況。12（五）實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論1．如何保證滅菌效果？2不同種類的微生物菌落形態(tài)有何差異？3如何為微生物選擇合適的培養(yǎng)基？實(shí)驗(yàn)二、微生物的顯微鏡觀察（一）實(shí)驗(yàn)?zāi)康模和ㄟ^(guò)實(shí)驗(yàn)使學(xué)生了解顯微鏡的結(jié)構(gòu)和使用方法，了解和掌握微生物的染色技術(shù)。（二）實(shí)驗(yàn)原理：（三）實(shí)驗(yàn)材料1.
7、菌種大腸桿菌，紅豆杉內(nèi)生真菌。2.染色液草酸銨結(jié)晶紫染液；蕃紅液。3.器具顯微鏡，香柏油，二甲苯，擦鏡紙，載玻片。（四）操作步驟1.將固定好的涂片加滴結(jié)晶紫1min，若干了，還要補(bǔ)加染料。2.用緩沖流水去染料。3.加蕃紅液復(fù)染30s。4.用緩沖流水沖去。5.用洗水紙吸干，直接用顯微鏡觀察，先用低倍鏡觀察，然后用油浸鏡觀察，作圖。（五）染色操作步驟及注意點(diǎn)染色法可以看到染色操作包括制片、固定、染色、媒染、脫色、復(fù)染、水洗、干燥等步驟，每一步都具有其操作要點(diǎn)和注意點(diǎn)，若不當(dāng)心，可能就得不到滿意的結(jié)果。1.制片制片要采用干凈的載波片，并注意接種環(huán)的無(wú)菌操作。做斜面菌體
8、片時(shí)，要防止菌體和水混和
