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《制藥工程基礎實驗實驗》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、實驗一、培養(yǎng)基的配置與微生物的接種培養(yǎng)實驗（一）實驗目的：通過實驗，使學生了解和掌握培養(yǎng)基的配置、消毒方法和接種與培養(yǎng)技術。了解微生物對營養(yǎng)物質的需求，不同微生物的生長差異。（二）實驗原理：微生物必須在含有所需要的營養(yǎng)元素的培養(yǎng)基上才能生長，不同種類的微生物有它所適宜生長的培養(yǎng)基，細菌和真菌的培養(yǎng)基不同，在長期的實踐中形成了有些著名的培養(yǎng)基配方和配置方法。微生物的培養(yǎng)過程中要防止其他微生物的存在和生長，因此在接種和培養(yǎng)過程中要進行滅菌和消毒，防止雜菌的干擾。滅菌方式中廣泛使用的是蒸汽滅菌，即濕熱滅菌。是熱滅菌的好處是滅菌效果好，因蛋白質在含水時易變性，另外蒸
2、汽穿透力大，含能量高。使用蒸汽滅菌器要注意排氣完全，否則達不到滅菌溫度。表1表示排空氣程度與實際溫度的關系。表1蒸汽滅菌其中空氣排除程度與器內溫度的關系空氣排除程度表壓力（kPa）滅菌器內的實際溫度（℃）完全排除98.07121排除2/398.07115排除1/398.07112排除1/398.07109完全未排除98.07100蒸汽滅菌器的壓力有的以1b/in2（磅/英寸2）、kg/cm2表示，現(xiàn)統(tǒng)一以帕（Pa）或千帕（kPa）表示，它們與溫度的關系如表4-2。表2蒸汽壓力與溫度的關系蒸汽壓力相應溫度（℃）kPaLb/in2Kg/cm234.4750.35
3、2107.768.95100.703115.5103.42151.055121.6137.90201.406126.6172.37251.756130.5206.84302.109134.4表3糖在不同溫度下熱滅菌的破壞情況分析方法糖名（10%糖液）滅菌方法103.42kPa(121℃)68.95~82.74kPa(115.6~118℃)55.16~68.95kPa(113~115.6℃)100℃15min20min20min30min含量%破壞%含量%破壞%含量%破壞%含量%破壞%旋光法葡萄糖乳糖麥芽糖蔗糖76.067.994.087.724.032.11
4、6.012.381.885.784.797.718.214.315.32.399.495.386.598.70.61.4.72.13.53.1.392.081.978.896.38.018.121.23.7表4一些微生物殺死的溫度與時間微生物熱死時間微生物熱死時間12溫度℃時間min溫度℃時間min脆弱假單胞菌氯針假單胞菌熒光假單胞菌賽氏桿菌（低溫性）海產(chǎn)弧菌（低溫性）鼠傷寒沙門氏菌506053302555351025308010*傷寒沙門氏菌桑夫頓伯格沙門氏菌金黃色葡萄球菌大腸桿菌結核桿菌產(chǎn)氣腸細菌60636061475056*75~303060*指活菌數(shù)
5、減少一個對數(shù)級即90%被殺死所需的時間。蒸汽滅菌適用范圍很廣，但主要是培養(yǎng)基的滅菌。在培養(yǎng)基滅菌中最需注意不要過多破壞營養(yǎng)，特別是糖類。糖類在濕熱滅菌時破壞情況見表3。（三）實驗材料1.大腸桿菌、紅豆杉內生真菌。2.生化培養(yǎng)箱。3.超靜工作臺3.接種環(huán)或無菌牙簽。4.酒精燈。5.無菌培養(yǎng)皿。6.肉湯培養(yǎng)基牛肉膏0.5g水100ml蛋白胨1.0gPH7.2NaCl0.5g加入1.2％瓊脂，即為固體完全培養(yǎng)基（CM）。7.PDA培養(yǎng)基：PDA）：馬鈴薯煮汁100毫升蔗糖2克瓊脂1.5克PH值5.5～6.0????制法：先將新鮮無病害的馬鈴薯洗凈，去皮后切成小薄片
6、，稱20克，加水100毫升，煮沸20分鐘后過濾，其濾汁為馬鈴薯煮汁。然后加瓊脂和蔗糖煮溶，后補足水分至100毫升，裝培養(yǎng)皿滅菌備用。（四）操作步驟1按上述要求配置2種培養(yǎng)基，分別裝入培養(yǎng)皿；2放入高壓鍋中蒸汽滅菌20min。3待培養(yǎng)基冷卻凝固后，在兩種培養(yǎng)基上分別接種大腸桿菌和紅豆杉內生真菌。37℃培養(yǎng)。42天后檢查生長情況。12（五）實驗結果與討論1．如何保證滅菌效果？2不同種類的微生物菌落形態(tài)有何差異？3如何為微生物選擇合適的培養(yǎng)基？實驗二、微生物的顯微鏡觀察（一）實驗目的：通過實驗使學生了解顯微鏡的結構和使用方法，了解和掌握微生物的染色技術。（二）實驗
7、原理：（三）實驗材料1.菌種大腸桿菌，紅豆杉內生真菌。2.染色液草酸銨結晶紫染液；蕃紅液。3.器具顯微鏡，香柏油，二甲苯，擦鏡紙，載玻片。（四）操作步驟1.將固定好的涂片加滴結晶紫1min，若干了，還要補加染料。2.用緩沖流水去染料。3.加蕃紅液復染30s。4.用緩沖流水沖去。5.用洗水紙吸干，直接用顯微鏡觀察，先用低倍鏡觀察，然后用油浸鏡觀察，作圖。（五）染色操作步驟及注意點染色法可以看到染色操作包括制片、固定、染色、媒染、脫色、復染、水洗、干燥等步驟，每一步都具有其操作要點和注意點，若不當心，可能就得不到滿意的結果。1.制片制片要采用干凈的載波片，并注意
8、接種環(huán)的無菌操作。做斜面菌體片時，要防止菌體和水混和
