hfq對傷寒沙門菌高滲應(yīng)激早期基因表達(dá)的調(diào)節(jié)

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1、Hfq對傷寒沙門菌高滲應(yīng)激早期基因表達(dá)的調(diào)節(jié)作者：謝新民李安平杜鴻茅凌翔羅哲王敏黃新祥【摘要】目的：探查傷寒沙門菌hfq基因在高滲應(yīng)激早期對其他基因表達(dá)的影響。方法：用自殺質(zhì)粒介導(dǎo)的同源重組方法制備傷寒沙門菌hfq基因缺陷變異株;利用傷寒沙門菌全基因組芯片技術(shù)，比較傷寒沙門菌野生株和hfq基因缺陷變異株在高滲應(yīng)激早期的基因表達(dá)譜差異，并選擇部分表達(dá)差異基因進(jìn)行實時定量PCR驗證。結(jié)果：傷寒沙門菌hfq基因缺陷變異株制備成功;基因表達(dá)譜比較分析結(jié)果表明傷寒沙門菌hfq基因缺陷變異株在高滲應(yīng)激早期有62個

2、基因表達(dá)上調(diào)，有32個基因表達(dá)下調(diào)。實時定量PCR結(jié)果與芯片分析一致。結(jié)論：Hfq作為一個調(diào)節(jié)因子在傷寒沙門菌高滲應(yīng)激早期對基因表達(dá)起重要調(diào)節(jié)作用?！娟P(guān)鍵詞】傷寒沙門菌;hfq;高滲應(yīng)激;基因芯片分析　　[Abstract]Objective:ToexploretheinfluenceofHfqongeneexpressionregulationofS.entericaserovarTyphiatearlystageofhyperosmoticstress.Methods：Thehfqdeleted

3、mutantofS.entericaserovarTyphiwaspreparedbyhomologousrecombinationmediatedbysuicideplasmid;thedifferenceof14geneexpressionprofilesbetweenthewildstrainandthehfqmutantatearlystageofhyperosmoticstresswasinvestigatedbygenomicassay;qRTPCRwasperformedtovali

4、datetheresultsofmicroarrayassay.Results：ThehfqdeletedmutantofS.entericaserovarTyphiwasconstructedsuccessfully;geneexpressionprofilesanalysisrevealedthatexpressionof62genesand32geneswereinducedanddecreasedrespectivelyinthehfqmutantatearlierstageofhyperos

5、moticstress.TheresultsofqRTPCRwereconsistentwiththeresultsofgenomicassay.Conclusion：HfqofS.entericaserovarTyphicanserveasanimportantfactortoregulategeneexpressioninresponsetohyperosmoticstress.　　[Keywords]SalmonellaentericaserovarTyphi;hfq;hyperosmotic

6、stress;genemicroarray　　傷寒沙門菌(SalmonellaentericaserovarTyphi，S.Typhi)是一種人類嚴(yán)重的腸道致病菌，已成為一種重要的原核基因表達(dá)與調(diào)控研究的模式生物。hfq基因編碼的蛋白是一種分子伴侶，最早是作為大腸埃希菌RNA噬菌體Qβ復(fù)制所必需的看家因子而被發(fā)現(xiàn)的[1]，它能夠幫助小RNA(small14RNAs，sRNA)與目標(biāo)RNA分子結(jié)合，通過增加sRNA的穩(wěn)定性，作為RNA分子伴侶在細(xì)菌的基因轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)目的基因的表達(dá)[2]。Hfq除了能穩(wěn)

7、定sRNA的結(jié)構(gòu)，影響mRNA的翻譯外，還能夠與RNA酶E(RNaseE)形成降解復(fù)合體，同時降解sRNA和mRNA，從而抑制目的基因的表達(dá)[3]。　　目前研究表明，在鼠傷寒沙門菌(SalmonellaentericaserovarTyphimurium,S.Typhimurium)中hfq基因與細(xì)菌的毒力有密切關(guān)系，hfq基因缺陷變異株的侵襲力明顯下降，動力也幾乎喪失[4]。傷寒沙門菌與鼠傷寒沙門菌同源性較高，而在傷寒沙門菌中，細(xì)菌在高滲應(yīng)激條件下有許多與侵襲相關(guān)的基因上調(diào)[5]，提示在高滲應(yīng)激下傷

8、寒沙門菌的基因表達(dá)調(diào)節(jié)機(jī)制十分復(fù)雜。傷寒沙門菌Hfq是一個非特異的RNA分子伴侶，在高滲應(yīng)激下能否作為一個調(diào)節(jié)因子參與基因表達(dá)調(diào)節(jié)值得關(guān)注。本研究擬利用傷寒沙門菌基因組芯片進(jìn)行表達(dá)譜分析，分析hfq基因在高滲應(yīng)激條件下對基因表達(dá)調(diào)控的影響?！　?材料與方法　　1.1材料　　1.1.1菌株和質(zhì)粒野生型S.TyphiGIFU10007，E.coliSY372λpir和自殺質(zhì)粒pGMB151由日本岐阜大學(xué)醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)教研室饋贈;E.coliDH5α由本室保存