fis對傷寒沙門菌基因表達的系統(tǒng)調(diào)節(jié)作用

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1、Fis對傷寒沙門菌基因表達的系統(tǒng)調(diào)節(jié)作用李安平，謝新民　茅凌翔，杜鴻，王敏，羅哲，黃新祥【摘要】目的：探討傷寒沙門菌調(diào)節(jié)因子fis對基因表達的系統(tǒng)調(diào)節(jié)作用。方法：用自殺質粒介導的同源重組方法制備傷寒沙門菌fis基因缺陷變異株，用脈沖場凝膠電泳分析fis缺陷變異株的基因組結構。利用傷寒沙門菌全基因組DNA芯片分析技術，比較傷寒沙門菌野生株和fis基因缺陷變異株的基因表達譜差異。用重組載體pBADfis回補fis缺陷變異株，選擇部分差異表達基因進行qRTPCR驗證，用半固體平板培養(yǎng)觀察野生株、fis缺陷變異株和回補株的動

2、力。結果：fis基因缺陷變異株含有二相鞭毛素編碼基因的線性質粒缺失，且動力消失;基因表達譜比較分析結果表明，傷寒沙門菌fis基因缺陷變異株在對數(shù)生長期94個基因出現(xiàn)表達差異;qRTPCR分析所選基因表達的結果與芯片分析結果相符;fis缺陷變異株在回補fis基因后，動力及差異表達基因都獲得明顯恢復。結論：Fis在傷寒沙門菌中對動力、侵襲及多種代謝相關基因的表達發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用?！娟P鍵詞】傷寒沙門菌;Fis;基因芯片;脈沖場凝膠電泳;基因表達調(diào)節(jié)　　[Abstract]Objective:Toexplorethesyst

3、emicregulationoffactorforinversionstimulation(fis)ongeneexpressioninSalmonellaentericaserovarTyphi.Methods：ThefisdeletedmutantofS.entericaserovarTyphiologousrebinationmediatedbysuicideplasmid;Pulsefieldgelelectrophoresisedtoinvestigatethegenomestructureofthefis

4、mutantstrain.ThegeneexpressionprofilesofutantofS.entericaserovarTyphiincubatedatlogphaseicDNAmicroarrayanalysis.Arebinantplasmid,pBADfis,containingthefisgeneoteredtovalidatetheresultsofmicroarrayinsomeselectedgenes.TheeffectofFisonthemotilityphenotypeisolidagar

5、plates.Results：Inthefisdeletedmutant,thelinearplasmidcontainingphase2flagellingenefljBAotilityutantatlogphase;expressionoftheselectedgenesinvestigatedbyqRTPCRilartotheresultofmicroarrayassay;afterplementingfisgeneinthefisdeletedmutant,themotilityandexpressionof

6、selectedgenesayplaythecentralroleincoordinatingtheexpressionofgenesinvolvedinmotile,andininvasionorsubstancemetabolisminS.entericaserovarTyphi.　　[Keyulation;microarray;PFGE;geneexpressionregulation　　沙門菌和大腸埃希菌含有豐富的小型結合蛋白，這些結合蛋白統(tǒng)稱為核相關蛋白(nucleoidassociatedproteins

7、，NAPs)。核相關蛋白可與DNA結合，從而引起細菌核酸的結構變化，如DNA的位點特異性重組，也能影響復制、轉錄等過程[1]。Fis(factorforinversionstimulation)屬小型DNA結合蛋白，最初作為一個位點特異性重組系統(tǒng)的輔助因子而被發(fā)現(xiàn)，目前已有研究表明其可作為特異性調(diào)節(jié)因子，調(diào)節(jié)某些特定操縱子基因的表達[2]?！　∫话銈抽T菌為一相沙門氏菌，只含有一相鞭毛素編碼基因fliC，其相應的抗原為H:d抗原或H:j抗原(d抗原的缺損型，在fliC:d的可變區(qū)缺失261bp)[3]。最近研究表明，

8、H:z66陽性傷寒沙門菌有兩相不同的鞭毛素編碼基因，即一相鞭毛素編碼基因fliC和二相鞭毛素編碼基因fljB:z66[4,5]。2007年Baker等[6]發(fā)現(xiàn)fljB:z66基因存在于一特殊的約27kb大小的線性質粒中。在鞭毛抗體存在下，鼠傷寒沙門菌等兩相菌株可自行變換鞭毛素基因的表達，而H:z66陽性傷寒沙門菌經(jīng)抗體誘導后只能