不同藥物對(duì)維氏氣單胞菌的抑菌作用研究

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1、不同藥物對(duì)維氏氣單胞菌的抑菌作用研究水產(chǎn)養(yǎng)殖2006級(jí)于書萍指導(dǎo)老師：黃小麗摘要：以28種常見藥物為材料，測(cè)定了其對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰的維氏氣單胞菌的生物學(xué)活性，結(jié)果表明，在所試的28種化學(xué)試劑中，以環(huán)丙沙星、氟苯尼考、奧福星、美福仙、羅美沙星、左氟沙星等共計(jì)14種對(duì)該菌有較強(qiáng)的抑制作用，而以前水產(chǎn)養(yǎng)殖中常用的四環(huán)素、青霉素、紅霉素等對(duì)此病原菌無抑菌作用或作用不明顯，顯示出病原菌對(duì)其可能已具有抗性，不適合作為它的抑菌藥物。關(guān)鍵詞：斑點(diǎn)叉尾鮰抑菌性MIC前言：斑點(diǎn)叉尾鮰是一種溫水性淡水魚類，適溫范圍0-38℃，生長(zhǎng)攝食溫度為5-36℃，最適生長(zhǎng)溫度為18-34℃，最佳攝食

2、溫度為18-30℃，當(dāng)水溫超過39℃時(shí)會(huì)出現(xiàn)呼吸變慢、行動(dòng)呆滯等不良反應(yīng)。在溶氧為3mg/L時(shí)能正常生長(zhǎng)，當(dāng)?shù)陀?.5mg/L會(huì)出現(xiàn)死亡現(xiàn)象．對(duì)pH值的適應(yīng)范圍為6。5-9.0，對(duì)鹽度的適應(yīng)值應(yīng)小于1‰【12】斑點(diǎn)叉尾鮰有密而細(xì)的口腔齒和咽喉齒，屬于有胃魚類，行動(dòng)敏捷，體色較深．一般認(rèn)為它屬肉食性魚類.在我國(guó)養(yǎng)殖面積比較廣，有著較好的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。然而隨著養(yǎng)殖面積的不斷擴(kuò)大，養(yǎng)殖水域環(huán)境的日益惡化，斑點(diǎn)叉尾鮰的病害越來越嚴(yán)重，給廣大的漁民朋友們帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失?！?】目前對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物細(xì)菌病進(jìn)行控制的主要手段是采用抗菌藥物治療。但由于對(duì)病原學(xué)、藥理學(xué)等方面認(rèn)識(shí)不

3、全面,在養(yǎng)殖過程中存在高劑量多種藥物混合使用等濫用、亂用藥物現(xiàn)象,雖然對(duì)殺滅病原菌有一定的效果,但毒副作用明顯,長(zhǎng)期使用,易導(dǎo)致病原微生物產(chǎn)生抗藥性。因此,在使用藥物治療細(xì)菌性疾病之前,必須測(cè)定該藥物對(duì)病原菌的敏感性研究?！?】對(duì)于水產(chǎn)病原的藥物敏感性的研究大都采用測(cè)定MIC，MBC等方法，目前報(bào)道的測(cè)定MIC的方法有液體法和平皿法，斜面法，其中由于液體法不能測(cè)定出不溶性藥物的MIC，故使用較少，以平皿法使用居多，平皿法是將細(xì)菌點(diǎn)種在含藥平板上，足夠藥液濃度便可抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，可較快篩選藥物，斜面法是在一系列試管中，以普通肉湯培養(yǎng)基按倍比稀釋法稀釋藥液，每管加入等

4、量的含菌普通肉湯和加入瓊脂量為2.6%的瓊脂培養(yǎng)基,使最終菌量為104CFU/ml、搖勻、擺成斜面;適宜溫度下培養(yǎng)16-18h觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果,記錄無菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度,即為該藥的最低抑菌濃度[1].1:材料與方法1、試驗(yàn)材料試驗(yàn)對(duì)象：斑點(diǎn)叉尾鮰維氏氣單胞菌（四川農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)室）主要試劑：藥敏紙片，蛋白胨，牛肉膏，氯化鈉，瓊脂，蒸餾水，主要儀器：光學(xué)顯微鏡，培養(yǎng)皿，鑷子，燒瓶，酒精燈，PH試紙，平板。2、試驗(yàn)方法2.1實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備2．1．1培養(yǎng)基的配制采用以下配方：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，瓊脂17g，蒸餾水1000mL，pH7.2。將除瓊脂外的各成分溶解

5、于蒸餾水中，校正pH，加入瓊脂，分裝于培養(yǎng)皿內(nèi)，121℃，15min高壓滅菌備用。2．1．2藥物敏感性試驗(yàn)【5】將28℃恒溫培養(yǎng)18～24h的菌落,用生理鹽水制成105CUF菌懸液均勻涂抹在平板上,貼上藥敏試紙,置恒溫箱內(nèi)24h后觀察并制表。抑菌圈直徑≤14mm為敏感,15-17mm,為中敏感,≥18mm為高敏感。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。2．1．3氟苯尼考等4種敏感藥物MIC的測(cè)定【6】取菌懸液1ml,加入含8ml液體培養(yǎng)基的無菌試管中；再吸取每種各藥敏紙片原藥稀釋液（6.4mg/ml）各5ml,沿管壁注入裝有5ml滅菌生理鹽水的滅菌試管內(nèi),搖勻制成2倍稀釋液。按上述操作

6、順序,制成6個(gè)濃度梯度,它們的濃度依次為:0.64、0.32、0.16、0.08、0.04、0.02mg/ml；再從6個(gè)不同濃度梯度試管中分別吸取1ml藥物稀釋液,依次加入到各種細(xì)菌稀釋液中混合均勻,置28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h,取出后觀察測(cè)定最小抑菌濃度(MIC)并制表。2.結(jié)果與討論2.1.藥敏實(shí)驗(yàn)用紙片法對(duì)病原菌維氏氣單胞菌菌株進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)，結(jié)果見表1，表1:不同藥物對(duì)維氏氣單胞菌的抑制作用藥物名稱代號(hào)抑菌圈半徑cm藥物含量判斷標(biāo)準(zhǔn)是否敏感乙酰螺旋霉素乙1.0磺胺異惡唑磺2.3氯霉素氯2.4四環(huán)素四1.8羅美沙星羅3.0多粘霉素多0.7新生霉素生0.7

7、鏈霉素鏈2.1丁胺卡那霉素丁1.6氯潔霉素潔0.6妥布霉素妥1.6麥迪霉素麥0.9新霉素新1.1美滿霉素滿1.2氟苯尼考尼3.1奧福星奧2.5美福仙美2.7青霉素青0.7恩諾沙星恩2.4利福平利1.5左氟沙星左3.2紅霉素紅1.8復(fù)方新諾明復(fù)2.3卡那霉素卡1.8克拉霉素克1.8痢特靈痢1.2環(huán)丙沙星環(huán)2.9阿奇霉素奇2.6注：每種藥物含藥量均為30ug/片。2.2MIC值測(cè)定從藥敏實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果中選擇4種抗菌能力較好的藥物采用兩倍稀釋法對(duì)維氏氣單胞菌菌株作MIC值測(cè)定(表2)。表2:藥物對(duì)維氏氣單胞菌的MIC值藥物mg/ml0.640.320.160.080.0

8、4MIC值mg/ml氟苯