double digestion(雙酶切反應(yīng))時(shí)universal buffer(通用緩沖液)的使用表

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1、DoubleDigestion(雙酶切反應(yīng))時(shí)UniversalBuffer(通用緩沖液)的使用表■說(shuō)明使用二種酶同時(shí)進(jìn)行DNA切斷反應(yīng)(DoubleDigestion)時(shí)，為了節(jié)省反應(yīng)時(shí)間，通常希望在同一反應(yīng)體系內(nèi)進(jìn)行。TaKaRa采用UniversalBuffer表示系統(tǒng)，并對(duì)每種酶表示了在各UniversalBuffer中的相對(duì)活性。盡管如此，在進(jìn)行DoubleDigestion時(shí)，有時(shí)還會(huì)難以找到合適的UniversalBuffer。本表以在pUC系列載體的多克隆位點(diǎn)處的各限制酶為核心，顯示了在DoubleDigestion

2、可使用的最佳UniversalBuffer條件。在本表中，各UniversalBuffer之前表示的[數(shù)字×]是指各UniversalBuffer的反應(yīng)體系中的最終濃度。TaKaRa銷售產(chǎn)品中添附的UniversalBuffer全為10倍濃度的緩沖液。終濃度為0.5×?xí)r反應(yīng)體系中的緩沖液則稀釋至20倍，1×?xí)r稀釋至10倍，2×?xí)r稀釋至5倍進(jìn)行使用?！鲎⒁狻?μgDNA中添加10U的限制酶，在50μl的反應(yīng)體系中，37℃下反應(yīng)1小時(shí)可以完全降解DNA?！鬄榉乐筍tar活性的產(chǎn)生，請(qǐng)將反應(yīng)體系中的甘油含量，盡量控制在10%以下。◇根據(jù)D

3、NA的種類，各DNA的立體結(jié)構(gòu)的差別，或當(dāng)限制酶識(shí)別位點(diǎn)鄰接時(shí)，有時(shí)會(huì)發(fā)生DoubleDigestion不能順利進(jìn)行的可能。