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《雙酶切Buffer說明》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、DoubleDigestion(雙酶切反應(yīng))時UniversalBuffer(通用緩沖液)的使用表■說明使用二種酶同時進行DNA切斷反應(yīng)(DoubleDigestion)時，為了節(jié)省反應(yīng)時間，通常希望在同一反應(yīng)體系內(nèi)進行。Takara采用UniversalBuffer表示系統(tǒng)，并對每種酶表示了在各UniversalBuffer中的相對活性。盡管如此，在進行DoubleDigestion時，有時還會難以找到合適的UniversalBuffer。本表以在pUC系列載體的多克隆位點處的各限制酶為核心，顯示了在Dou
2、bleDigestion可使用的最佳UniversalBuffer條件。在本表中，各UniversalBuffer之前表示的[數(shù)字×]是指各UniversalBuffer的反應(yīng)體系中的最終濃度。Takara銷售產(chǎn)品中添附的UniversalBuffer全為10倍濃度的緩沖液。終濃度為0.5×?xí)r反應(yīng)體系中的緩沖液則稀釋至20倍，1×?xí)r稀釋至10倍，2×?xí)r稀釋至5倍進行使用。?■注意◇1μgDNA中添加10U的限制酶，在50μl的反應(yīng)體系中，37℃下反應(yīng)1小時可以完全降解DNA?！鬄榉乐筍tar活性的產(chǎn)生，請將反
3、應(yīng)體系中的甘油含量，盡量控制在10%以下?！蟾鶕?jù)DNA的種類，各DNA的立體結(jié)構(gòu)的差別，或當(dāng)限制酶識別位點鄰接時，有時會發(fā)生DoubleDigestion不能順利進行的可能。EnzymeAcc?IBamHIBglIICla?IEcoRIEcoRVHincIIHindIIIKpn?INco?INde?IAcc?I－0.5×K1×T1×M1×M0.5×K1×M1×M1×M1×M+BSA1×TBamHI0.5×K－1×K1×K1×K1×K0.5×K1×K0.5×K1×K+BSA1×KBgl?II1×T1×K－1×H
4、1×H1×H2×K1×K1×T1×K+BSA1×HCla?I1×M1×K1×H－1×H1×H1×M1×M1×M1×K+BSA1×HEcoRI1×M1×K1×H1×H－1×H1×M1×M1×M1×K+BSA1×HEcoRV0.5×K1×K1×H1×H1×H－2×T1×K0.5×K1×K+BSA1×HHincII1×M0.5×K2×K1×M1×M2×T－1×M1×M1×M+BSA1×THindIII1×M1×K1×K1×M1×M1×K1×M－1×M1×K+BSA1×KKpn?I1×M0.5×K1×T1×M1×M0
5、.5×K1×M1×M－0.5×K+BSA1×TNco?I1×M+BSA1×K+BSA1×K+BSA1×K+BSA1×K+BSA1×K+BSA1×M+BSA1×K+BSA0.5×K+BSA－1×K+BSANde?I1×T1×K1×H1×H1×H1×H1×T1×K1×T1×K+BSA－Not?I0.5×K+BSA0.5×K+BSA1×H+BSA1×H+BSA1×H+BSA1×H+BSA0.5×K+BSA0.5×K+BSA0.5×K+BSA0.5×K+BSA1×H+BSAPst?I1×M1×K1×H1×H1×H1×
6、H1×M1×M1×M1×K+BSA1×HPvu?I0.5×K1×K1×K1×K1×K1×K0.5×K1×K0.5×K1×K+BSA1×KSac?I1×M0.5×K0.5×K1×M1×M0.5×K1×M1×M1×L0.5×K+BSA1×TSal?I1.5×T1.5×T1×H1×H1×H1×H1.5×K1.5×K1.5×T+BSA1.5×T+BSA1×HSma?I1×T+BSA0.5×T+BSA1×T+BSA1×T+BSA1×T+BSA0.5×K+BSA1×T+BSA1×T+BSA1×T+BSA1×T+BSA1×
7、T+BSASpe?I1×M1×K1×H1×M1×H1×H1×M1×M1×M1×K+BSA1×HSph?I0.5×K1×K1×H1×H1×H1×H2×T1×K0.5×K1×K+BSA1×HXba?I1×M0.5×K2×T1×M1×M2×T1×M1×M1×M1×M+BSA1×TXho?I1×M1×K1×H1×H1×H1×H1×M1×M1×M1×K+BSA1×H?EnzymeNot?IPst?IPvu?ISac?ISal?ISma?ISpe?ISph?IXba?IXho?IAcc?I0.5×K+BSA1×M0.5×
8、K1×M1.5×T1×T+BSA1×M0.5×K1×M1×MBamHI0.5×K+BSA1×K1×K0.5×K1.5×T0.5×T+BSA1×K1×K0.5×K1×KBgl?II1×K+BSA1×H1×K0.5×K1×H1×T+BSA1×H1×H2×T1×HCla?I1×K+BSA1×H1×K1×M1×H1×T+BSA1×M1×H1×M1×HEcoRI1×K+BSA1×H1×K1×M1×H1×T+B
