峰形前拖解決方案和實例

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1、峰形前拖解決方案和實例峰形對稱性的優(yōu)劣對峰面積和分離度有很大的影響，從而影響分析結果的準確性，是色譜工作者不得不重視的問題，也是讓大家最為頭疼的問題之一。然而引起峰形異常的因素很多，如色譜柱本身裝填不好、強保留化合物對色譜柱的污染、填料中殘留硅羥基引起的次級保留效應、柱頭塌陷、柱外死體積等等，針對不同的情況我們可以有不同的對策。在這里我們撇開所有的污染、塌陷、死體積等其它因素，假設系統(tǒng)是好的，柱子是新的、好的，單純探討液相方法與峰形前拖之間的關系，通過調(diào)整液相方法來解決峰形前拖的問題。??前拖峰在譜圖上有幾種表現(xiàn)形式，主要有以下3種，第一種比較明顯一些，后兩種，容易讓人懷疑這個峰里面是不是有兩

2、種物質(zhì)沒有徹底的分開，第三種前拖更是讓人質(zhì)疑是否是色譜柱受到了污染引起的肩峰。1.jpg????發(fā)現(xiàn)峰形前拖時，本人建議按下面的步驟逐步排除可能的原因，然后找到相應的對策，消除峰形前拖的狀況、改善峰形。1）先檢查一下是否是樣品過載樣品過載，通常會引起峰形變差，導致前拖、后拖或平頭峰，如果出現(xiàn)平頭峰、峰高超過2000mAU或峰很高的同時又前拖、后拖得很厲害通常都認為是過載的，但這一點也并不絕對，因為不同化合物的吸收強度不一樣，如果一種化合物在某一波長處有強吸收，即使出現(xiàn)了平頭峰，樣品也不一定過載；相反如果吸收弱，則高濃度條件下峰也不見得有多高；所以樣品是否過載應該結合濃度、進樣體積和峰形一起來判

3、斷。通常認為峰高在100mAU左右比較合適，不至于因過載影響峰形。由于樣品過載引起的峰形前拖不容易消除，也可能根本無法消除，繼續(xù)采用以下的峰形改善措施可能不會有什么作用，而且在過載的情況下無法看清正常濃度時樣品真實的分離狀況和峰形，因此需要優(yōu)先考慮是否過載，否則繼續(xù)往下調(diào)整峰形的努力將無任何意義。2)檢查是否是用流動相溶解樣不用流動相溶解樣品容易在譜圖上產(chǎn)生溶劑峰和前拖（上述的幾種形狀的前拖都有），這種情況通常是在溶解樣品的溶劑（如純甲醇）洗脫能力比流動相（如甲醇：0.4%磷酸溶液＝38：62）強的情況下發(fā)生，如例2，而溶劑洗脫能力比流動相相對較弱時，目前未見此現(xiàn)象；也有人說也會產(chǎn)生后拖，但本

4、人做樣以來并沒有碰到過這種的情況。正常的峰形應該是樣品在色譜柱上均勻的前移的情況下得到的，濃度分布在整個通過色譜柱柱床的過程中任何時候都呈正態(tài)分布，如下圖所示：2.jpg為什么用洗脫能力比流動相強的溶劑溶解樣品會容易產(chǎn)生前拖？以“姜黃素標準品的測定”為例，樣品溶劑是甲醇，流動相為乙腈：4%冰醋酸水溶液＝48：52，直接進樣時表現(xiàn)出前拖，如下圖a；用流動相溶解樣品后前拖消失，峰形對稱，如下圖b：3.jpg一種可能的解釋是，進針后，在流動相的推動下樣品溶液很快到達色譜柱，此時樣品溶液未能被流動相很快稀釋，結果是，作為樣品溶劑的局部濃度過大，由于甲醇的洗脫能力比流動相強，因此甲醇帶著部分樣品提前進入

5、到了填料里面，而另一部分則還沒來得及進入填料周圍的環(huán)境就發(fā)生了變化——由甲醇變成了流動相，所以一部分樣品提前被甲醇帶出來而另一部分沒有，導致樣品譜帶的濃度分布發(fā)生了變化，濃度中心偏離了正常峰時的位置。同時作為樣品溶劑的甲醇畢竟有限，只有幾十微升，因此只能帶著很少一部分樣品提前進入填料，形成前拖；4.jpg根據(jù)這一解釋，出現(xiàn)這種前拖時，似乎樣品只有在周圍環(huán)境與流動相相同時才不會發(fā)生這種現(xiàn)象，如果用甲醇溶解的樣品濃度為10ug/ml時出現(xiàn)前拖（此時樣品周圍環(huán)境與流動相不同），那么將1000ug/ml高濃度甲醇溶解的樣品用流動相稀釋至原來濃度的1/100倍（此時樣品的濃度也為10ug/ml，周圍環(huán)境

6、與流動相也不完全相同），是不是也會出現(xiàn)前拖呢？很顯然不會，因為它和用流動相溶解已經(jīng)沒有什么區(qū)別，差異太小了，只有1/100。也就是說不一定非得用流動相溶解樣品才會消除這種因樣品溶劑而引起的前拖，那么到底要與流動相差異多小才不會引起這種狀況呢？在我們的實驗過程中發(fā)現(xiàn)，只要用流動相將原樣品稀釋至原來濃度的1/4倍（體積比，原樣品溶液：流動相＝1：3混合）就可以達到和用流動相溶解相似的效果，例子如下：石杉堿甲標準品的測定色譜柱：UlitmateXB－C18，4.6×250mm；流動相：甲醇：緩沖鹽溶液＝25：75；??????緩沖鹽溶液的配制：（配制0.08M醋酸銨水溶液，再用冰醋酸調(diào)節(jié)PH至6.0

7、）；檢測波長：308nm；??????溫度：室溫26度；??????????????????????流速:1ml/min；????????進樣量：20ul；5.jpg由此可以看出，不用流動相溶解樣品對色譜峰形是有很大影響的，容易造成前拖，所以特別是開發(fā)方法的時候盡量使用流動相來溶解樣品。當然，如果已經(jīng)用了較強的溶劑溶解樣品，得到了一個前拖峰，而重新用流動相配制樣品又很麻煩時，那么可以用流動相將樣品