電泳技術研究進展

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1、電泳技術研究進展學生：張麗麗學號：2011103043指導老師:何大俊老師摘要：電泳技術是一種先進的檢測手段，與其它先進技術相配合，能創(chuàng)造出驚人的成果，可使人們用較少代價獲得最優(yōu)效益。比如它對解決當前人類所面臨的食品、能源、環(huán)境和疾病等一系列迫切問題，都有積極作用，顯示出強大的生命力。因此電泳技術正越來越多地為人們所重視,廣泛應用于各個領域關鍵詞：電泳技術；發(fā)展；應用；前景1809年俄國物理學家Рейсе首次發(fā)現(xiàn)電泳現(xiàn)象。他在濕粘土中插上帶玻璃管的正負兩個電極，加電壓后發(fā)現(xiàn)正極玻璃管中原有的水層變混濁，即帶負電荷的粘土顆粒向正極移動，這就是電泳現(xiàn)

2、象。1909年Michaelis首次將膠體離子在電場中的移動稱為電泳。他用不同pH的溶液在U形管中測定了轉(zhuǎn)化酶和過氧化氫酶的電泳移動和等電點。1937年瑞典Uppsala大學的Tiselius對電泳儀器作了改進，創(chuàng)造了Tiselius電泳儀，建立了研究蛋白質(zhì)的移動界面電泳方法，并首次證明了血清是由白蛋白及α、β、γ球蛋白組成的，由于Tiselius在電泳技術方面作出的開拓性貢獻而獲得了1948年的諾貝爾化學獎。1948年Wieland和Fischer重新發(fā)展了以濾紙作為支持介質(zhì)的電泳方法，對氨基酸的分離進行過研究。從本世紀50年代起，特別是195

3、0年Durrum用紙電泳進行了各種蛋白質(zhì)的分離以后，開創(chuàng)了利用各種固體物質(zhì)（如各種濾紙、醋酸纖維素薄膜、瓊脂凝膠、淀粉凝膠等）作為支持介質(zhì)的區(qū)帶電泳方法。1959年Raymond和Weintraub利用人工合成的凝膠作為支持介質(zhì)，創(chuàng)建了聚丙烯酰胺凝膠電泳，極大地提高了電泳技術的分辨率，開創(chuàng)了近代電泳的新時代。30多年來，聚丙烯酰胺凝膠電泳仍是生物化學和分子生物學中對蛋白質(zhì)、多肽、核酸等生物大分子使用最普遍，分辨率最高的分析鑒定技術，是檢驗生化物質(zhì)的最高純度：即“電泳純”（一維電泳一條帶或二維電泳一個點）的標準分析鑒定方法，至今仍被人們稱為是對生物

4、大分子進行分析鑒定的最后、最準確的手段，即“LastCheck”。由80年代發(fā)展起來的新的毛細管電泳技術，是化學和生化分析鑒定技術的重要新發(fā)展，己受到人們的充分重視。2.電泳的原理在固定的介質(zhì)中進行電泳過程，減少了擴散和對流等干擾作用。最初的支持介質(zhì)是濾紙和醋酸纖維素膜，目前這些介質(zhì)在實驗室已經(jīng)應用得較少。在很長一段時間里，小分子物質(zhì)如氨基酸、多肽、糖等通常用濾紙或纖維素、硅膠薄層平板為介質(zhì)的電泳進行分離、分析，但目前則一般使用更靈敏的技術如HPLC等來進行分析。這些介質(zhì)適合于分離小分子物質(zhì)，操作簡單、方便。但對于復雜的生物大分子則分離效果較差。

5、凝膠作為支持介質(zhì)的引入大大促進了電泳技術的發(fā)展，使電泳技術成為分析蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的重要手段之一。最初使用的凝膠是淀粉凝膠，但目前使用得最多的是瓊脂糖凝膠和聚丙烯酰胺凝膠。蛋白質(zhì)電泳主要使用聚丙烯酰胺凝膠。電泳裝置主要包括兩個部分：電源和電泳槽。電源提供直流電，在電泳槽中產(chǎn)生電場，驅(qū)動帶電分子的遷移。電泳槽可以分為水平式和垂直式兩類。垂直板式電泳是較為常見的一種，常用于聚丙烯酰胺凝膠電泳中蛋白質(zhì)的分離。電泳槽中間是夾在一起的兩塊玻璃板，玻璃板兩邊由塑料條隔開，在玻璃平板中間制備電泳凝膠，凝膠的大小通常是12cm×14cm，厚度為1mm～2

6、mm，近年來新研制的電泳槽，膠面更小、更薄，以節(jié)省試劑和縮短電泳時間。制膠時在凝膠溶液中放一個塑料梳子，在膠聚合后移去，形成上樣品的凹槽。水平式電泳，凝膠鋪在水平的玻璃或塑料板上，用一薄層濕濾紙連接凝膠和電泳緩沖液，或?qū)⒛z直接浸入緩沖液中。由于pH值的改變會引起帶電分子電荷的改變，進而影響其電泳遷移的速度，所以電泳過程應在適當?shù)木彌_液中進行的，緩沖液可以保持待分離物的帶電性質(zhì)的穩(wěn)定。為了更好的了解帶電分子在電泳過程中是如何被分離的，下面簡單介紹一下電泳的基本原理。在兩個平行電極上加一定的電壓（V），就會在電極中間產(chǎn)生電場強度（E），上式中L是電

7、極間距離。在稀溶液中，電場對帶電分子的作用力（F），等于所帶凈電荷與電場強度的乘積：F=qE上式中q是帶電分子的凈電荷，E是電場強度。這個作用力使得帶電分子向其電荷相反的電極方向移動。在移動過程中，分子會受到介質(zhì)粘滯力的阻礙。粘滯力（F’）的大小與分子大小、形狀、電泳介質(zhì)孔徑大小以及緩沖液粘度等有關，并與帶電分子的移動速度成正比，對于球狀分子，F(xiàn)’的大小服從Stokes定律，即：F’=6πrηυ式中r是球狀分子的半徑，η是緩沖液粘度，υ是電泳速度(υ=d/t，單位時間粒子運動的距離，cm/s)。當帶電分子勻速移動時：F=F’，∴q·E=6πrηυ

8、電泳遷移率（m）是指在單位電場強度（1V/cm）時帶電分子的遷移速度：LVE=電泳是指帶電顆粒在電場的作用下發(fā)生遷移的過程。許多重要的生