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《酪氨酸的提取及其酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、結(jié)果分析與討論:由上述三組圖表可知，Km值是一個(gè)特征值，它與酶的濃度無(wú)關(guān)，在一定的溫度和酸度條件下為常數(shù)。另外，由圖二、三可知，銅試劑和KCl溶液都是多巴的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，兩者競(jìng)爭(zhēng)酶的同一個(gè)活性中心，如果提高底物濃度可以克服這種競(jìng)爭(zhēng)性抑制。查文獻(xiàn)可得，KCl的抑制常數(shù)10mmol/L，Vmax=0.77。而實(shí)驗(yàn)測(cè)得，KCl的抑制常數(shù)mol/L，Vmax=0.84。可見(jiàn)，KCl的抑制常數(shù)與文獻(xiàn)值相差較大，由計(jì)算Ki的公式)][1(max+·=KiIVKmk可知，Vmax、Km、k這三個(gè)量影響著。其中主要由底物的濃度[S]、酶的活性和吸光度A決定Ki的值的大小。首先底物是多巴，
2、它需要冷藏保存。然后酶是細(xì)胞產(chǎn)生的一種具體催化性能的蛋白質(zhì)，很容易受高溫、酸、堿等的作用而變性，酶變性后即失去活性，所以酶催化作用的環(huán)境一般是在體溫下，接近中性的介質(zhì)中進(jìn)行。冷藏可以使大多數(shù)酶的壽命大大地延長(zhǎng)，所以本實(shí)驗(yàn)所用的土豆和研缽等提取酶的用具，以及磷酸緩沖溶液都必須事先充分冷卻，同時(shí)提取酶的操作時(shí)間亦應(yīng)盡可能地短。否則會(huì)使酶失活，從而影響后面實(shí)驗(yàn)測(cè)定的經(jīng)過(guò)酶促反應(yīng)后的溶液吸光度。最后，由A＝abc，其中a為吸光系數(shù)，單位L/(g·cm)，b為液層厚度（通常為比色皿的厚度），單位cm，c為溶液濃度，單位g/L，可得，影響吸光度A的因素是b和c。a是與溶質(zhì)有關(guān)的一個(gè)常
3、量。此外，溫度通過(guò)影響c，而影響最佳溫度的測(cè)定分別在不同溫度測(cè)定酶的活性,結(jié)果上圖所示:以酶的活性為縱坐標(biāo),溫度為橫坐標(biāo)作圖,如上圖所示,可看出不同溫度對(duì)酶活性的影響情況。由圖可看出,酪氨酸酶的最適溫度為℃。隨著溫度的升高,酪氨酸酶的活性不斷提高,達(dá)到最大值后,酶的活性又逐漸降低。當(dāng)溫度達(dá)到℃,酶的活性直線(xiàn)下降。因此,調(diào)節(jié)溫度特別是低溫條件能有效地抑制酶的活性。由圖可知，當(dāng)溶液中酶的含量增加時(shí)，曲線(xiàn)斜率也增加，這表明酶濃度高，其反應(yīng)活性也高。銅試劑的對(duì)酶活性的影響如圖所示，兩直線(xiàn)在Y軸的截距是相同的。且由圖可知，銅試劑是多巴的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，二者競(jìng)爭(zhēng)酶的同一個(gè)活性中心，如果
4、提高底物的濃度可以克服這種競(jìng)爭(zhēng)性抑制。由4可知Km=0.011092423，Vmax=0.000084，且由上圖知，當(dāng)抑制劑濃度為[I]=10mol/L時(shí)，斜率1.310)][1(max=+·=KiIVKmk于是得Ki=mol/L)][1(50KmSKiIC+=KCl對(duì)酶活性的影響由圖可知，KCl溶液是多巴的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，二者競(jìng)爭(zhēng)酶的同一個(gè)活性中心，如果提高底物的濃度可以克服這種競(jìng)爭(zhēng)性抑制。由4可知Km=0.011092423，Vmax=0.000084，且由上圖知，當(dāng)抑制劑濃度為[I]=10mol/L時(shí)，斜率0.285.)][1(max=+·=KiIVKmk于是得Ki=
5、mol/L)][1(50KmSKiIC+=
