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《革蘭氏染色與顯微觀察》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、實驗一：細菌的革蘭氏染色與顯微鏡觀察（一）實驗目的1.了解普通光學顯微鏡的基本構(gòu)造和工作原理2.學習并掌握油鏡的原理和使用方法。3.在油鏡下觀察細菌幾種基本形態(tài)4．掌握細菌革蘭氏染色法（二）實驗原理1．顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)及油鏡的工作原理?????現(xiàn)代普通光學顯微鏡利用目鏡和物鏡兩組透鏡系統(tǒng)來放大成像，故又常?被稱為復式顯微鏡。它們由機械裝置和光學系統(tǒng)兩大部分組成。機械裝置最主要包括調(diào)焦系統(tǒng)、載物臺和物鏡轉(zhuǎn)換器等運動部件，以及底座、鏡臂和鏡筒等支撐部件。光學系統(tǒng)包括不同倍數(shù)的物鏡、目鏡以及由聚光鏡和反光鏡組成的照明裝置。顯微鏡的成像原理（放大原理）：光線反光鏡遮光鏡通光孔標本（一定要透明）物鏡
2、的透鏡（第一次放大成倒立實像）鏡筒目鏡（在放大成虛像）眼顯微鏡的放大倍數(shù)=目鏡放大倍數(shù)*物鏡放大倍數(shù)在顯微鏡的光學系統(tǒng)中，物鏡的性能最為關(guān)鍵，它直接影響著顯微鏡的分辨率。而在普通光學顯微鏡通常配置的幾種物鏡中，油鏡的放大倍數(shù)最大，對微生物學研究最為重要。與其他物鏡相比，油鏡的使用比較特殊，需在載玻片與鏡頭之間加滴鏡油，這主要有如下二方面的原因：（1）.增加照明亮度????油鏡的放大倍數(shù)可達100Χ，放大倍數(shù)這樣大的鏡頭，焦距很短，直徑很小，但所需要的光照強度卻最大。從承載標本的玻片透過來的光線，因介質(zhì)密度不同（從玻片進入空氣，再進入鏡頭），有些光線會因折射或全反射，不能進入鏡頭，致使在使用
3、油鏡時會因射入的光線較少，物像顯現(xiàn)不清。所以為了不使通過的光線有所損失，在使用油鏡時須在油鏡與玻片之間加入與玻璃的折射率（n=1.55）相仿的油鏡（通常用香柏油，其折射率n=1.52）。????（2.）增加顯微鏡的分辨率顯微鏡的分辨率或分辨力(resolutionorresolvingpower)是指顯微鏡能辨別兩點之間的最小距離的能力。從物理學角度看，光學顯微鏡的分辨率受光的干涉現(xiàn)象及所用物鏡性能的限制，分辨力D可表示為：D=λ/2N.A，式中λ=光波波長；NA=物鏡的數(shù)值孔徑值。???光學顯微鏡的光源不可能超出可見光的波長范圍（0.4--0.7μm），而數(shù)值孔徑值則取決于物鏡的鏡口角和
4、玻片與鏡頭間介質(zhì)的折射率，可表示為：NA=n×sinα式中α為光線最大入射角的半數(shù)。它取決于物鏡的直徑和焦距，一般來說在實際應用中最大只能達到120O，而n為介質(zhì)折射率。由于香柏油的折射率（1.52）比空氣及水的折射率（分別為1.0和1.33）要高，因此以香柏油作為鏡頭于玻片之間介質(zhì)的油鏡所能達到的數(shù)值孔徑值（NA一般在1.2-1.4）要高于低倍鏡、高倍鏡等干鏡（NA都低于1.0）。若以可見光的平均波長0.55μm來計算，數(shù)值孔徑通常在0.65左右的高倍鏡只能分辨出距離不小于0.4μm的物體，而油鏡的分辨率卻可達到0.2μm左右。locatedintheTomb,DongShenJiaba
5、ng,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame2．革蘭氏染色法是1884年由丹麥病理學家Christain?Gram氏創(chuàng)立的，革蘭氏染色法可將所有的細菌區(qū)分為革蘭氏陽性菌（G+）和革蘭氏陰性菌（G-）兩大類。革蘭氏染色法是細菌學中最重要的鑒別染色法。革蘭氏染色法所以能將細菌分為兩大類：染色反應呈藍紫色
6、的稱為革蘭氏陽性細菌，用G+表示；染色反應呈紅色（復染顏色）的稱為革蘭氏陰性細菌，用G-表示。細菌對于革蘭氏染色的不同反應，是由這兩類細菌細胞壁的結(jié)構(gòu)和組成不同決定的。實際上，當用結(jié)晶紫初染后，像簡單染色法一樣，所有細菌都被染成初染劑的藍紫色。碘作為媒染劑，它能與結(jié)晶紫結(jié)合成結(jié)晶紫一碘的復合物，從而增強了染料與細菌的結(jié)合力。當用脫色劑處理時，兩類細菌的脫色效果是不同的。革蘭氏陽性細菌的細胞壁主要由肽聚糖形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)組成，壁厚、類脂質(zhì)含量低，用乙醇(或丙酮)脫色時細胞壁脫水、使肽聚糖層的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)孔徑縮小，透性降低，從而使結(jié)晶紫-碘的復合物不易被洗脫而保留在細胞內(nèi)，經(jīng)脫色和復染后仍保留初染劑
7、的藍紫色。革蘭氏陰性菌則不同，由于其細胞壁肽聚糖層較薄、類脂含量高，所以當脫色處理時，類脂質(zhì)被乙醇(或丙酮)溶解，細胞壁透性增大，使結(jié)晶紫-碘的復合物比較容易被洗脫出來，用復染劑復染后，細胞被染上復染劑的紅色。（一）實驗器材1．菌種枯草芽孢桿菌12～18h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物、金黃色葡萄球菌約24h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物、大腸桿菌24h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物2．溶液或試劑香柏油，結(jié)晶紫染色液、盧戈碘液、95%乙醇、番紅染色液，蒸餾
