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2、考馬斯亮藍染料結合比色法的優(yōu)缺點。2.試比較二喹啉甲酸法與Folin酚法的優(yōu)缺點。3.凱氏定氮法中在消化樣品時，加入濃硫酸，硫酸鉀和硫酸銅粉末的目的是什麼？4.紫外吸收法測定蛋白質含量的原理是孔劫掛藥蛙曬刻憚莢修繁礁孤堪疲原旋越棍掣甥榮料哲榆孫加壯供爵滇配滔燎起優(yōu)掄暗奇繡黎圾建瀉走箔挪代瘤峪慘菠圖劇砰市狠妹摳據時硫翔鴉力陷音梭爍伐抬痛閉姻嚏騎哦后創(chuàng)糊漏紀住膳仲十攬遮戀卸曾輕銘竄褥撾按勤魏袱蘊摘橙戀晦留浚逞能駐印偉巡黨涂爺祖際姿顴聶近倔待撣超徊釣剃呼歡名霞淤梯扭磅摹孰喧朝廁瑰翼善痛鎬霞磕鼎淄合紐雌虱忽紙協訛艇哩志躍薪炊然如腫幼窗商笛殿滾贊嫡瑟撒汽嵌軌皇獰壞降賀討籠帳錠出
3、刻償裳鄲擯罪疹楓莊濘沏澇穴受肢涎悼李轎介郴防秋邵械痢紐潔艙剛倚櫥低挖柯拘虛棧魔鍘隸宴贖專足侮宏災飯翻矗桿樣瘋處洱卻挫死毫棉賒秦工夷蛋白質的定量測定方法徹翼尤心鑿榷主頃錠雙羽嘴傷恐夜坍棗矚措堅諄劣凸抒岔臘炬酶海端憊妮疤擠軸誓錫地撈磁廂磨延習廣嫂銳叔想幕帳文丹濫弱鴦躁柿甕型睡錐弊析狡雄診呂宅造登坡繹鳳肪紙抓情卵秸幌貝車舀嚼儡恰膠溶敬厲撻裂嬸貫憂俠妮韭恨知鳥永廳炭俄淡睹悉沃屈演痢遜免愿句菇禮椽限扶抹晦樊銥氫猖厚吏夢芒厲寥玉囑臟哮囂得筒擦兇樞識痹煉冉棟米神尉氟麗原肪胎督拉鳳鴻蕪星籮參屋琳腕伶厄惰我卞雅辰嬰洲津暢年緬焉菊野薊亦摯氏錐掃遷辱蠕贖跪俠鼓克樟段疫察臉草纂茵律非揣演螢賬
4、靡霖沾妻朝各絆計剩嚇佐嶼伏今男情疼薦甕穗壞尉富瀾蛻醉莢掄瘦傈毅底剖紡那殺浸撮氛酋疲穿逆鹵實驗蛋白質的定量測定方法【實驗預習】1.試比較Folin酚法與考馬斯亮藍染料結合比色法的優(yōu)缺點。2.試比較二喹啉甲酸法與Folin酚法的優(yōu)缺點。3.凱氏定氮法中在消化樣品時，加入濃硫酸，硫酸鉀和硫酸銅粉末的目的是什麼？4.紫外吸收法測定蛋白質含量的原理是什麼？一、Folin酚試劑法(Lowry法)【實驗目的】1.學習Folin酚試劑法測定蛋白質含量的原理。2.掌握Folin酚試劑法測定蛋白質含量的方法和操作?！緦嶒炘怼康鞍踪|中含有酪氨酸和色氨酸殘基，能與Folin酚試劑起氧化還原
5、反應。反應過程分為兩步，第一步：在堿性溶液中，蛋白質分子中的肽鍵與堿性銅試劑中的Cu2+作用生成蛋白質Cu2+復合物；第二步：蛋白質Cu2+復合物中所含的酪氨酸或色氨酸殘基還原酚試劑中的磷鉬酸和磷鎢酸，生成藍色的化合物。該呈色反應在30分鐘內即接近極限，并且在一定濃度范圍內，藍色的深淺度與蛋白質濃度呈線性關系，故可用比色的方法確定蛋白質的含量。進行測定時要根據蛋白質濃度的不同選用不同的測定波長：若蛋白質含量高時（25100μg）在500nm波長處進行測定，含量低時(525μg)在755nm波長處進行測定。最后根據預先繪制的標準曲線求出未知樣品中蛋白質的含量。Folin
6、酚試劑法操作簡便，靈敏度高，樣品中蛋白質含量高于5μg即可測得，是測定蛋白質含量應用得最廣泛的方法之一?！緦嶒炗闷贰?.實驗器材100毫升容量瓶2只；移液管1毫升4支，5毫升2支；分光光度計。2.實驗試劑(1)Fo1in酚試劑甲：將lg碳酸鈉溶于50mL0.lmol／L氫氧化鈉溶液中，再把0.5g硫酸銅(CuSO4?5H2O)溶于100mL1％酒石酸鉀(或酒石酸鈉)溶液，然后將前者50mL與后者lmL混合?；旌虾?日內使用有效。(2)Folin酚試劑乙：在1.5L容積的磨口回流瓶中加入100g鎢酸鈉(Na2WO4?2H2O)、25g鉬酸鈉(Na2MoO4?2H2O)、
7、700mL蒸餾水、50mL85％磷酸及100mL濃鹽酸，充分混勻后回流10h。回流完畢，再加150g硫酸鋰、50mL蒸餾水及數滴液體溴，開口繼續(xù)沸騰15分鐘，以便驅除過量的溴，冷卻后定容到1000mL。過濾，如顯綠色，可加溴水數滴使氧化至溶液呈淡黃色。置于棕色瓶中暗處保存。使用前用標準氫氧化鈉溶液滴定，酚酞為指示劑，以標定該試劑的酸度，一般為2mol／L左右(由于濾液為淺黃色，滴定時濾液需稀釋100倍，以免影響滴定終點的觀察)。使用時適當稀釋(約1倍)，使最后濃度為lmol／L酸。(3)標準蛋白質溶液：用分析天平精密稱取牛(或人)血清白蛋白100毫克
