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1、阿魏酸鈉對高糖誘導(dǎo)下原代系膜細(xì)胞增殖的影響作者：石明雋羅化肖瑛郭兵張國忠【摘要】目的：探討阿魏酸鈉（SF）對高糖誘導(dǎo)下原代腎小球系膜細(xì)胞（GMC）增殖的作用及其機(jī)制。方法：原代培養(yǎng)腎小球系膜細(xì)胞，分為正常組、甘露醇組、高糖組、高糖加不同濃度SF組，分別于處理后24h、48h收集細(xì)胞。用4-甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）法檢測細(xì)胞增殖；免疫細(xì)胞化學(xué)檢測p53和p38絲裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）的表達(dá)。結(jié)果：48h內(nèi)，高糖促進(jìn)GMC增殖并上調(diào)p38MAPK蛋白的表達(dá)，抑制p53的表達(dá)，SF能明顯對抗高糖的這種作用，其作用隨SF濃度的增加、作用時(shí)間的延長而加強(qiáng)。結(jié)論：SF可能是通過抑
2、制p38MAPK通路，促進(jìn)p53的合成，從而抑制高糖誘導(dǎo)的GMC增殖。【關(guān)鍵詞】糖尿病腎??；蛋白質(zhì)p53；蛋白激酶類；腎小球系膜細(xì)胞；阿魏酸鈉；p38絲裂原活化蛋白激酶［Abstract］Objective:Toinvestigatedtheeffectsandmechanismofsodiumferulate(SF)ontheproliferationofmesangialcellsinducedbyhighglucose.Methods:Theprimaryglomerularmesangialcellsweredividedintonormalgloucosegroup,
3、mannitolgroup,highgloucosegroupandhighgloucosegroupplusdifferentconcentrationofSFgroups.Cellswerecollectedat24hand48hofcultivation.CellproliferationwasmeasuredbyMTTassay.Expressionofp53andp38MAPKproteinswasdetectedwithimmunocytochemistrymethod.Results:Highglucosesignificantlypromotedmesangia
4、lcellproliferation,up-regulatedp38MAPKproteinexpression,anddown-regulatedp53expressionwithin48h.TheseeffectswereinhibitedbySFinaconcentration-dependentmanner.Conclusion:SFcaninhibitproliferationofmesangialcellsinducedbyhighglucosepossiblythroughsuppressingthepathwayofp38MAPKandincreasingthel
5、evelsofp53.［Keywords］diabeticnephropathies;proteinp53;proteinkinases;glomerularmesangialcells;sodiumferulate;p38mitogenactivatedproteinkinase糖尿病腎?。╠iabeticnephropathy，DN）的發(fā)病機(jī)制較復(fù)雜，至今尚未完全明了，但長期的高血糖是引起DN的始動(dòng)因素和中心環(huán)節(jié)［1］。腎小球系膜細(xì)胞（glomerularmesangialcells，GMC）為腎小球固有細(xì)胞，有實(shí)驗(yàn)證實(shí)高糖可刺激其活化，進(jìn)而產(chǎn)生收縮、增生，合成并分泌多種炎
6、癥介質(zhì)和基質(zhì)成分，促進(jìn)腎小球硬化［2，3］。阿魏酸鈉(sodium5ferulate,SF)是我國自行研制開發(fā)的新的非肽類內(nèi)皮素拮抗劑，臨床上可用于治療慢性腎小球腎炎、腎病綜合征和DN等疾病。2006年9月~2007年4月用原代培養(yǎng)GMC，觀察SF對高糖環(huán)境中GMC增殖的作用及對p53和p38絲裂原活化蛋白激酶(p38mitogenactivatedproteinkinase,p38MAPK)表達(dá)的影響，探討SF對高糖誘導(dǎo)下GMC增殖的可能作用，為進(jìn)一步闡明SF改善DN的作用機(jī)理，提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1材料和方法1.1材料1.1.1主要試劑SF（吉林西點(diǎn)藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司）
7、；甘露醇（石家莊四藥有限公司）；MEM培養(yǎng)基（美國Gibco公司）；L-谷氨酰胺、4-甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)、二甲基亞砜(DMSO)、胰蛋白酶（美國Sigma公司）；胎牛血清(FCS，hyclone）；p53抗體、p38MAPK抗體、SABC試劑盒（武漢博士德生物有限公司）。1.1.2主要儀器設(shè)備CO2孵箱（美國REVCO公司；倒置顯微鏡(IX70)；酶標(biāo)儀(美國BIO-RAD公司)；CM-2000B型生物醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)(北京航空航天大學(xué))。1.2方法1.2.1大鼠原代腎小球系膜細(xì)胞培養(yǎng)雄
