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《應(yīng)用臺(tái)盼藍(lán)-茜素紅聯(lián)合染色實(shí)時(shí)觀察晶狀體上皮細(xì)胞形態(tài)與活性的研究.doc》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、應(yīng)用臺(tái)盼藍(lán)-茜素紅聯(lián)合染色實(shí)時(shí)觀察晶狀體上皮細(xì)胞形態(tài)與活性的研究【摘要】目的：探討臺(tái)盼藍(lán)-茜素紅染色應(yīng)用于晶狀體上皮細(xì)胞形態(tài)及活性研究的可行性。方法：取大耳白兔、正常人、白內(nèi)障患者的晶狀體前囊膜，行臺(tái)盼藍(lán)-茜素紅染色，光鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)、染色效果并判斷其活性。結(jié)果：兔、正常人、白內(nèi)障患者晶狀體上皮細(xì)胞通過臺(tái)盼藍(lán)-茜素紅聯(lián)合染色均可獲得良好的染色效果。光鏡下可清楚顯示晶狀體上皮細(xì)胞的形態(tài)并能區(qū)分正常與死亡的細(xì)胞。結(jié)論：臺(tái)盼藍(lán)-茜素紅活性染色可用于觀察晶狀體上皮細(xì)胞的形態(tài)、密度、面積以及細(xì)胞的活力，
2、是研究晶狀體上皮細(xì)胞的一種良好而實(shí)用的方法。【關(guān)鍵詞】晶狀體上皮細(xì)胞臺(tái)盼藍(lán)茜素紅活性染色[Abstract]Objective:Toassessthefeasibilityoftrypan-blueandalizarinredvitalstainingtolensepithelialcells.Methords:Anteriorlenscapsulesofrabbits,healthadultsandpatientswithcataractswerestainedbytrypan-blueanda
3、lizarinred,thenobservedthecellulaappearanceandtheeffectivenessofthestainingonlightmicroscope.Results:Therewerefavourableeffectivenessofthestaining.Trypan-blueandalizarinredvitalstainingwascapableofdisplayingthecellulaappearanceanddistinguishingthenorm
4、alandabnormalcells.Conclusion:Trypan-blueandalizarinredvitalstainingrefertolensepithelialcells,whichwasapracticalmethordtoobservethemorphology,density,areaandthecellulavisvitalis.[Keywords]Lensepithelialcells；Trypan-blue;Alizarinred;Vitalstaining臺(tái)盼藍(lán)染色
5、法是鑒定細(xì)胞活力最常用的方法之一。Spence等（1976年）認(rèn)為該染色法在眼科也是評(píng)價(jià)角膜內(nèi)皮活力最常用的方法。由于該法不能顯示出細(xì)胞輪廓，故難以判定細(xì)胞死活的比例。茜素紅能使細(xì)胞間質(zhì)的鈣著色，故可清晰地顯示細(xì)胞的輪廓，這對(duì)于了解角膜內(nèi)皮細(xì)胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)非常有益。運(yùn)用茜素紅聯(lián)合臺(tái)盼藍(lán)染色可成功顯示出角膜內(nèi)皮細(xì)胞及其活性，使角膜內(nèi)皮細(xì)胞的研究邁出了一大步。晶狀體上皮細(xì)胞(lensepithelialcells,LECs)是白內(nèi)障研究的焦點(diǎn)，現(xiàn)有的HE細(xì)胞染色法難以滿足LECs形態(tài)學(xué)研究的需要特別是
6、細(xì)胞的實(shí)時(shí)活性觀察。為此我們將茜素紅臺(tái)盼藍(lán)聯(lián)合染色法應(yīng)用于晶狀體上皮細(xì)胞，以期探索一種新的、更好的LECs形態(tài)及活性研究方法。1材料和方法1.1材料3（1）正常人透明晶狀體前囊膜：3例均來源于急性外傷死亡5小時(shí)以內(nèi)的正常人透明晶狀體，年齡20~25歲。手術(shù)顯微鏡下，剪除角膜和虹膜，暴露晶狀體，自制截囊針于晶狀體11點(diǎn)處做一開口，用囊膜剪切一4mm×4mm大小的中央?yún)^(qū)前囊膜，并留前囊膜下端與殘留晶體囊袋相連，翻轉(zhuǎn)前囊膜內(nèi)面朝外。（2）大耳白兔晶狀體前囊膜：10只，兔齡3~4個(gè)月，體重2~2.5kg。
7、兔耳緣靜脈空氣栓塞處死后迅速摘除眼球，晶狀體前囊膜制備方法同正常人晶狀體前囊膜。（3）老年性白內(nèi)障晶狀體前囊膜：30例，皮質(zhì)性，年齡41~85歲，平均67.9歲。取白內(nèi)障超聲乳化手術(shù)中連續(xù)環(huán)形撕囊獲得的前囊膜，約4~5mm，所有前囊膜取材后立即進(jìn)行染色。1.2染色方法所有囊膜在制備好后，立即置于玻片上，首先用2.5%臺(tái)盼藍(lán)染色90秒，生理鹽水輕輕漂洗除去染液。1%茜素紅復(fù)染60秒，生理鹽水輕輕漂洗，漂洗后將下端連接處剪開，前囊膜移至預(yù)先滴有生理鹽水的玻片上。移動(dòng)時(shí)輕輕夾著囊膜邊緣，防止對(duì)晶狀體上皮
8、造成的機(jī)械性損傷，且要保證上皮面朝上?？諝庵凶匀桓稍锖螅霉鈱W(xué)顯微鏡下觀察。具有活性的上皮細(xì)胞邊界呈紅色，核不著色。無活性的上皮細(xì)胞表現(xiàn)為邊界不清，細(xì)胞核呈圓形，藍(lán)色。2結(jié)果3種來源的晶狀體上皮，通過臺(tái)盼藍(lán)-茜素紅活性染色均可獲得良好的染色效果。正常人透明晶狀體上皮細(xì)胞鑲嵌型排列，大小形態(tài)基本一致。具有活性的上皮細(xì)胞呈多角形，輪廓清晰，邊界呈紅色，核不著色。無活性的上皮細(xì)胞表現(xiàn)為邊界不清，細(xì)胞核染藍(lán)色呈圓形（見圖1）。兔晶狀體上皮細(xì)胞染色同正常人透明晶狀體上皮細(xì)胞相似，但邊界更清楚
