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1、基于免疫膠體金標記技術的檢測研究及其在堆肥中的應用展望作者：賴萃曾光明黃丹蓮馮沖凌胡霜 蘇峰峰趙美花黃超危臻【摘要】金納米顆粒作為一種性能優(yōu)異的標記物應用廣泛。隨后發(fā)展出來的免疫膠體金標記技術作為一種靈敏度高、操作步驟簡便、檢測快速的免疫反應檢測技術得到廣泛關注。本文介紹了免疫膠體金標記技術的基本原理、制備方法并詳述了近年來該技術的新發(fā)展。此外，結合免疫膠體金標記技術在免疫檢測與環(huán)境檢測實際工作中的應用，展望了其在堆肥環(huán)境檢測中的應用潛力和發(fā)展前景?！娟P鍵詞】膠體金；標記；免疫檢測；堆肥;評述 AbstractＧoldna
2、noparticlehasbeenwidelyusedasagoodlabelingsubstance.Subsequently,increasingconcernhasbeenpaidtoimmunogoldlabelingtechniquewhichhashighsensitivity,simpleprocedureandrapiddetectioninimmunoassay.Ｔhebasicprinciple,preparationmethodsandimportantdevelopmentsofimmunogoldla
3、belingtechniquewereintroducedinthisarticle.Inaddition,thenewapplicationsandprospectsofimmunogoldlabelingtechniqueincompostdetectionwereproposedbasedontheapplicationsinimmunoassayandenvironmentalanalysis. KeywordsColloidalgold;Labeling;Immunoassay;Composting;Review
4、 1引言堆肥被認為是將固體廢物減量化、資源化的最佳途徑[1]。研究建立有效而實用的原位、在體、實時、高靈敏度、高選擇性的分析檢測方法，用于檢測與控制堆肥過程中生物組分及污染物，這是堆肥研究中的關鍵技術。傳統(tǒng)的堆肥分析檢測方法常需要繁雜、冗長的萃取、提純、濃縮、色譜分離等步驟，而且試劑用量大，費用高[2]。免疫膠體金標記技術是以膠體金為示蹤標記物，應用于特異性抗原抗體反應的一種新型免疫標記技術。膠體金具有納米材料所特有的三大效應：表面效應、小尺寸效應和宏觀量子隧道效應，具有很大的比表面積，獨特的光學、導電、導熱等物理特性以及良好
5、的生物相容性[3～5]，可以與蛋白質、核酸等非共價結合，且檢測不依賴昂貴的激光檢測儀器，只需普通光學儀器，甚至肉眼可辨。另外免疫膠體金標記技術具有制作方便、價格低廉、容易操作、無放射性污染等優(yōu)點，滿足了現場快速環(huán)境檢測及實時監(jiān)測等方面的要求。但是該技術在環(huán)境污染治理領域，特別是堆肥環(huán)境檢測的應用起步較晚，相關報道較少。本文通過評述免疫膠體金標記技術近年來的新發(fā)展及實際應用情況，特別是在環(huán)境領域的應用進展來展望其在堆肥環(huán)境檢測中的應用前景。 2免疫膠體金標記技術的研究現狀 2.1膠體金標記原理與制備膠體金是氯金酸在還原劑的作
6、用下，聚合成特定大小的金顆粒，并由于靜電作用形成一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故稱之為膠體金[6]。在堿性條件下，膠體金顆粒表面帶負電荷，可與目標蛋白質所帶正電荷基團之間形成非共價鍵的靜電吸引而牢固結合，這種結合對所標蛋白的生物學活性無明顯影響。吸附在膠體金表面的抗原或抗體能定向將膠體金顆粒載運到組織或細胞內、固相載體上的相應抗體、抗原的位置。由于金顆粒具高電子密度的特性，這些標記物在抗原抗體反應處聚集達到一定密度時（即金顆粒107個/mm2），出現肉眼可見的粉紅色斑點[7]。膠體金溶液的常見制備方法大致分為白磷還原法、硼氫化鈉還原法、
7、抗壞血酸鹽還原法、檸檬酸三鈉還原法和鞣酸檸檬酸三鈉還原法。其基本原理是向一定濃度的金溶液內加入適量還原劑，使金離子還原為金原子。通過改變反應體系中氯金酸與還原劑的比例可得到所需不同直徑的金顆粒。常規(guī)制備膠體金的方法是用電爐加熱。Sun等[8]改進了制備方法，采用微波技術所制膠體顆粒體系穩(wěn)定，并且能控制顆粒大小。膠體金標記物又被稱為膠體金結合物、膠體金探針或免疫金。被標記物須經過徹底除鹽的預處理，而制備穩(wěn)定的膠體金結合物受多種因素影響，如金顆粒大小、離子濃度、被標記物用量及標記體系的pH值等。最適pH值一般接近或略大于被標記物
8、的等電點，而被標記物的用量取決于金顆粒的大小。評價膠體金質量的方法有肉眼觀察、光譜分析評價、電鏡評價及Zeta電位分析等。肉眼觀察膠體金的顏色可對其質量進行初步判斷。在可見光范圍內（400～700nm）對膠體金顆粒進行掃描獲得膠體金可見光吸收光譜。3～20nm金顆粒在520n
