周輝 胚胎移植移植技術(shù) 教研

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1、胚胎移植與體外受精技術(shù)雞西實(shí)驗(yàn)中學(xué)生物教研組周輝2010.04.08胚胎移植胚胎移植是將良種雌性動物配種后的早期胚胎取出，移植道同種的生理狀態(tài)相同的其他雌性動物體內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育成為新個(gè)體，所以也稱作借腹懷胎。胚胎移植有什么意義：⑴可以充分發(fā)揮優(yōu)良母畜的繁殖潛力，提高繁殖效率；　?、瓶梢约铀倨贩N改良，擴(kuò)大良種畜群；⑶可以控制疾病，克服不育；⑷可以代替種畜引進(jìn)；⑸可以保存遺傳資源；⑹胚胎移植也是其他胚胎技術(shù)（胚胎分割、胚胎嵌性、別鑒定和核移植等）的基礎(chǔ)一、同期發(fā)情和超數(shù)排卵（一）供體、受體的選擇畜牧學(xué)選擇：胚胎移植的供體一般是需要加速繁殖的生產(chǎn)能力較高的優(yōu)良品種，受體則是繁殖

2、性能高的本地品種。獸醫(yī)學(xué)選擇：主要任務(wù)是排除病畜，尤其是要把那些生殖器官患有疾病的個(gè)體清理出去。（二）供體母畜的超數(shù)排卵　　排卵率可以通過藥物的方法進(jìn)行控制。應(yīng)用外源性促性腺激素誘發(fā)卵巢多個(gè)卵泡發(fā)育，并排出具有受精能力的卵子的方法，稱為超數(shù)排卵，簡稱“超排”。大量研究證明，引起家畜超數(shù)排卵的物質(zhì)是與生殖生理有關(guān)的激素或促激素，并且較深入了解了引起卵成熟和排卵的機(jī)理，使超數(shù)排卵技術(shù)廣泛應(yīng)用于家畜繁殖。各種激素的作用：對卵巢產(chǎn)生作用并能引起卵的成熟和排卵的激素主要有：孕酮，雌二醇（E2），促卵泡激素（FSH）、促黃體激素（LH）、促性腺激素釋放激素（GnRH）等。這些激素對卵巢

3、的作用有相同之處，但也有差別。促黃體激素（LH）和孕酮的急劇增加是排卵的直接原因，排卵后剩下的卵泡細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)辄S體，并分泌孕酮，抑制其他卵泡的發(fā)育。一般都采用促卵泡素（FSH）+前列腺素F2α(PGF2α)超排藥物系列，也有人用孕馬血清促性腺激素（PMSG）+PMSG搞血清+PGF2α。誘導(dǎo)家畜超數(shù)排卵，都需注射外源激素，其目的就是人工的使動物的激素水平達(dá)到閾值。從而誘發(fā)卵的成熟與排放。超數(shù)排卵的方法采用不同激素組合的方法進(jìn)來研究較多，其中誘導(dǎo)母牛超數(shù)排卵的試驗(yàn)歸納起來有：1）促卵泡素（FSH）＋其他激素：小劑量多次注射FSH，每天兩次，3～4天，第3～5天注射前列腺素（PG

4、F2α）以溶解黃體；2）孕馬血清促性腺素（PMSG）＋其他激素：性周期的8～12天注射一次PMSG，兩天后注射PGF2α促使黃體溶解，后48hr，母牛發(fā)情排卵，效果好。（三）供體、受體的同期發(fā)性發(fā)情的同步化：進(jìn)行胚胎移植，必須使供體與受體同步發(fā)情，也就是有相同的生殖周期。通常供、受體同時(shí)注射PGF2α，牛為0.4mg，羊?yàn)?.2mg。哺乳動物的生殖周期是各式各樣的，有的一年只有一次發(fā)情期，有一定的生殖季節(jié)。胚胎移植時(shí)受體與供體同步發(fā)情，處于相同的生殖生理狀態(tài)，才可能使一個(gè)供體超數(shù)排卵獲得的胚胎在多個(gè)受體子宮內(nèi)受孕。家畜同步化發(fā)情是胚胎移植能否成功的關(guān)鍵之一。4受體母畜與供體

5、同時(shí)注射PGF2α。（四）供體的發(fā)性鑒定和配種在正常情況下，供體大多數(shù)在超排處理結(jié)束后12~48h發(fā)性。發(fā)情鑒定主要是以接受爬跨且站立不支為主要判定標(biāo)準(zhǔn)，輔以直腸檢查。一般在發(fā)情后8~12h第一次輸精，以后每間隔8~12h輸精一次，直到發(fā)性結(jié)束。二、胚胎采集（一）采集胚胎時(shí)間以發(fā)情日為第零天，在第6~7.5天或第2~3天分別從子宮角或輸卵管回收胚胎。（二）胚胎采集方法1.手術(shù)法采集方法（1）輸卵管沖胚用注射器的磨鈍針頭刺入子宮角尖端，注入沖胚液，然后從輸卵管的傘部接取沖胚液，這種方法適用于在排卵后4天以內(nèi)進(jìn)行。牛羊沖胚液用量為10ml即可。（2）子宮沖胚從子宮角的輸卵管端注

6、入沖胚液，由基部接取；也可以由子宮角基部液注入沖胚液，另一端接取。沖胚液用量依子宮角容積（母畜種類）大小而不同，羊一般為50~100ml.2.非手術(shù)法采集胚胎三、胚胎的檢查及鑒定并非所以的胚胎都用于移植，因?yàn)槭芫芽赡苡校嘿|(zhì)量問題；發(fā)育不完全；采集時(shí)受損。顯微鏡下觀察采集胚胎應(yīng)該是：外觀飽滿、透明帶完整、卵間隙小，卵裂球大小均勻，界限清晰，透亮。充實(shí)，胞質(zhì)均勻等。（一）撿卵撿卵借助于實(shí)體顯微鏡進(jìn)行。進(jìn)口的特制集卵杯，上端連接在沖胚管的出口上，杯中篩也允許沖卵液流出，胚胎集中在杯底，直接在顯微鏡下?lián)炻?，十分方便。（二）胚胎質(zhì)量的鑒定和分級1.胚胎的鑒定在20~40倍實(shí)體顯微鏡

7、下觀察受精卵的形態(tài)、色調(diào)、分裂球的大小、均勻度、細(xì)胞密度、與透明帶的間隙以及變性情況等。2.胚胎的分級胚胎分A、B、C三個(gè)等級。四、胚胎移植（一）手術(shù)法移植全身麻醉，手術(shù)將子宮和輸卵管拉出，用鈍形針在移植部位刺一個(gè)小孔，小心地將胚胎輸入。牛、羊3日齡以前的胚胎（8細(xì)胞前）移植部位為輸卵管，將輸卵管由輸卵管傘插入輸卵管內(nèi)一定深度，將胚胎注入。5日齡后的胚胎應(yīng)移植到子宮角尖端，即在宮管結(jié)合部。手術(shù)移植法移卵容易，損傷小。（二）非手術(shù)法移植方法已較完善，克服了移植器通過子宮頸的困難和子宮肌肉收縮排斥胚胎的技術(shù)問題，成功率