吡格列酮對(duì)ad模型大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的保護(hù)作用研究

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1、吡格列酮對(duì)AD模型大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的保護(hù)作用研究　　摘要：目的研究吡格列酮（Pioglitazone，Pio）對(duì)Aβ25-35所致的大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的保護(hù)作用。方法雙側(cè)海馬CA1區(qū)注射β-淀粉樣蛋白（Aβ25-35）建立AD大鼠模型。用不同劑量吡格列酮（40、80mg/kg）灌胃4w后，進(jìn)行Morris水迷宮定位航行和空間探索實(shí)驗(yàn)，觀察吡格列酮對(duì)AD模型大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的保護(hù)作用。結(jié)果海馬CA1區(qū)注射Aβ25-35后，模型組逃避潛伏期明顯延長，穿越平臺(tái)次數(shù)明顯減少，平臺(tái)滯留時(shí)間明顯縮短；吡格列酮組與模型組

2、相比較，逃避潛伏期明顯縮短，穿越平臺(tái)次數(shù)明顯增多，平臺(tái)滯留時(shí)間明顯延長；吡格列酮組較正常對(duì)照組無明顯差異。結(jié)論海馬CA1區(qū)注射Aβ25-35可導(dǎo)致大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙，吡格列酮對(duì)β淀粉樣蛋白引起的大鼠學(xué)記憶障礙有改善作用?！　￡P(guān)鍵詞：吡格列酮；β淀粉樣蛋白；海馬　　隨著人口老齡化的進(jìn)展，阿爾茨海默?。ˋD）的患病率逐年遞增，危害性不斷增加。降低AD的發(fā)病率，進(jìn)行有效地防治成為老年神經(jīng)病學(xué)研究領(lǐng)域不容忽視的問題。AD典型病理改變?yōu)槔夏臧撸⊿P）、神經(jīng)原纖維纏結(jié)（NFT）及神經(jīng)元丟失。β淀粉樣蛋白（Aβ）是老年斑

3、的主要成分，其過量生成和沉積，會(huì)引起一系列反應(yīng)，導(dǎo)致學(xué)習(xí)記憶減退，認(rèn)知障礙等臨床表現(xiàn)，因此，β淀粉樣蛋白被認(rèn)為是AD發(fā)病機(jī)制中的起始因素和關(guān)鍵環(huán)節(jié)[1]。Aβ降解減少或生成增加均可導(dǎo)致Aβ的異常沉積，導(dǎo)致AD的發(fā)生[2]。吡格列酮屬于噻唑烷二酮類藥物，是一種新型胰島素增敏劑，能夠增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)胰島素作用的敏感性，減輕胰島素抵抗，主要用于2型糖尿病及胰島素抵抗的治療。一些研究表明，吡格列酮可過激活過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）有潛在治療神經(jīng)變性疾病的可能[3]。本實(shí)驗(yàn)采用雙側(cè)海馬CA1區(qū)注射β淀粉樣

4、蛋白造模方式，研究吡格列酮對(duì)大鼠的學(xué)習(xí)記憶的改善作用?！　?動(dòng)物與材料　　雄性Sprague-Dawley大鼠，340～380g，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供（動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（陜）2012-003）。β淀粉樣蛋白（美國Sigma公司，A4559-MG），用DMEM溶解，37℃孵育5d，使其成為聚集狀態(tài)。吡格列酮（日本Takera公司，純度>99%）。腦立體定位儀（NarishigeSN-3，日本）；Morris水迷宮（成都泰盟科技有限公司，MT-200，四川）?！　?方法　　SD大鼠40只

5、，隨機(jī)分為4組，即對(duì)照組，模型組，低劑量吡格列酮治療組，高劑量吡格列酮治療組，每組10只。大鼠用10%水合氯醛（4mL/kg）腹腔注射麻醉后，頭顱固定在腦立體定位儀上，頭皮備皮，消毒手術(shù)區(qū)皮膚，無菌下操作，做正中切口暴露前囟，參照大鼠腦立體定位圖譜，以前囟為原點(diǎn)，向后3.0mm，旁開2.0mm，為穿刺點(diǎn)，鉆開顱骨，自腦表面用微量進(jìn)樣器進(jìn)針3.0mm至海馬。對(duì)照組每側(cè)海馬注射生理鹽水3μl，其余3組每側(cè)海馬注射5μgAβ25-353μl，緩慢注射后，停針5min。縫合，保暖觀察至動(dòng)物蘇醒。　　建模后第2d開

6、始，低、高劑量組分別給予吡格列酮40mg/kg、80mg/kg，溶于3ml生理鹽水中灌胃。對(duì)照組和模型組給予等量生理鹽水。灌胃4w?！　orris水迷宮實(shí)驗(yàn)：水迷宮為直徑120cm，高50cm，水深30cm，逃逸平臺(tái)位于水下1cm，水溫控制在（25±2）℃，平臺(tái)置于第四象限，從4個(gè)象限等距標(biāo)記4個(gè)入水點(diǎn)，①定位航行試驗(yàn)（placenavigationtest）：治療結(jié)束后第1d開始，共5d，每天分上、下午各4次，分別從4個(gè)不同象限，將大鼠頭朝池壁放入水中，記錄其2min內(nèi)尋找平臺(tái)所需時(shí)間（逃避潛伏期）。

7、若大鼠入水后2min內(nèi)未能找到平臺(tái)，則將其置于平臺(tái)上并停留10s，引導(dǎo)學(xué)習(xí)記憶，逃避潛伏期記錄為120s。②空間探索試驗(yàn)（spatialprobetest）：實(shí)驗(yàn)第6d撤除平臺(tái)，將動(dòng)物將大鼠面向池壁從4個(gè)不同象限放入水池，測(cè)試2min內(nèi)跨越原平臺(tái)位置的次數(shù)。數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS16.0進(jìn)行分析，采用均值比較、一維方差分析統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，以P<0.05來表示差異的顯著性?！　?結(jié)果　　Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)顯示，對(duì)照組潛伏期為（12.74±1.74）s，模型組潛伏期延長為（38.43±3.87）s，對(duì)照組穿越平臺(tái)次

8、數(shù)為7.25±3.57，模型組穿越平臺(tái)次數(shù)減少為3.47±1.26，對(duì)照組的平臺(tái)滯留時(shí)間為（2.5±1.27）s，模型組平臺(tái)滯留時(shí)間縮短為（1.03±0.61）s。對(duì)照組與模型組有顯著性差異（P<0.05）?！　∵粮窳型委熃M與模型組比較，低劑量組的潛伏期為（20.19±2.51）s、高劑量組的潛伏期（22.28±2.19）s，較模型組的潛伏期（38.43±3.87）s明顯縮短（P<0.05）；低劑量組穿越平臺(tái)次數(shù)為4.95±