吡格列酮在大鼠放射性肺纖維化中保護作用的研究

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1、萬方數(shù)據(jù)·英文縮略語·5萬方數(shù)據(jù)·論文·吡格列酮在大鼠放射性肺纖維化中保護作用的研究前言放射治療是胸部惡性腫瘤的主要治療方式之一，放射性肺損傷是胸部腫瘤放療的常見不良反應(yīng)。放射性肺纖維化則是放射性損傷的晚期并發(fā)癥，它可導(dǎo)致呼吸困難，影響患者的生活質(zhì)量，甚至導(dǎo)致呼吸衰竭，目前尚無特異性的肺纖維化治療手段‘11。過氧化物酶體增殖物激活受體(PPARs)是核激素受體超家族的配體活化的核轉(zhuǎn)錄因子，越來越多的證據(jù)表明自然和合成的PPAR7激動劑在體外都具有強大的抗纖維化作用，吡格列酮為合成的PPAR7激動劑【2】。本課題組前期的研究提示，血管緊張素II(angiotensinII)是放射性肺纖維化

2、形成的重要因素‘31。AngiotensinII的這種作用主要通過血管緊張素II1型受體fangiotensintypeII1receptor，ATlR)實現(xiàn)‘鍆。本課題組研究提示【51，PPAR7作為一種保護性蛋白，在未用體外激動劑的情況下，PPA腳生理性升高不足以抑制致纖維化蛋白的活性。目前尚無大鼠放射性肺纖維化模型中PPA腳對ATlR的影響的研究。放射性肺纖維化目前尚缺乏有效的治療方法，在前期研究證實血管緊張素II在放射性性肺纖維化中起重要作用的基礎(chǔ)上，本文擬研究吡格列酮在放射性肺纖維化中的保護作用，以及對ATl受體表達的影響。實驗材料與方法一、實驗材料(一)實驗動物SPF級Spr

3、agueDawley(SD)大鼠60只，雌雄各半，月齡3個月，體重178．2459，購置中國醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心。6萬方數(shù)據(jù)(二)儀器設(shè)備儀器名稱生產(chǎn)廠家直線加速器oncor-H彩色超聲診斷儀EUB一8500病理切片機RY-2235烘片機HL282光學(xué)顯微鏡4。C及．20℃冰箱．80℃深凍冰箱離心機RNA濃度測定儀eDNA反轉(zhuǎn)錄儀Real．timePCR擴增儀BiofugeStratos高速低溫離心機電泳儀Bio．RadWesternBlot實驗系統(tǒng)制冰機德國西門子公司日本日立公司德國LEICA公司上海合力實業(yè)有限公司日本OnMPUS公司中國海爾公司美國ThermoElection公司德

4、國Eppmdrof公司美國Bio．Rad公司瑞士Roche公司美國Sorvall公司美國Bio．Rad公司德國ZIGERA公司(----)實驗試劑l、HE染色實驗試劑4％中性甲醛固定液、AF液、75％乙醇、85％71醇、95％7,醇、無水乙醇、二甲苯、石蠟、蘇木素、鹽酸酒精、1％稀氨水、伊紅、中性樹膠等，均由中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院中心實驗室提供。2、Masson染色試劑Masson復(fù)合染色液：酸性復(fù)紅1昏麗春紅29、橘黃G29、25％醋酸300ml。2％苯胺藍液：苯胺藍2昏冰醋酸2ml、蒸餾水100ml、0．2％醋酸水溶液、5％磷鎢酸、無水乙醇、二甲苯、中性樹膠等，均由中國醫(yī)科大學(xué)附屬

5、盛京醫(yī)院中心實驗室提供。7萬方數(shù)據(jù)3、免疫組織化學(xué)染色試劑(1)PBS液：購白北京中衫金橋生物技術(shù)有限公司。(2)PPAR吖多克隆抗體：購自美國SantaCruz公司，編號Sc．7273。(3)免疫組織化學(xué)染色試劑盒：購自北京中衫金橋生物技術(shù)有限公司，編號SP．9000。內(nèi)容包括3％H202去離子水3ml、封閉用正常山羊血清工作液3ml、生物素標(biāo)記山羊抗兔＼大鼠＼小鼠＼豚鼠IgG二抗工作液3ml、辣根酶標(biāo)記鏈霉素卵白工作液(SABC)3ml。(4)濃縮型DAB試劑盒：購自北京中衫金橋生物技術(shù)有限公司，編號ZLI一9017。內(nèi)容包括DABchromogen(20x)lml、DABsubst

6、rate60ml。4、Westernbolt試劑：(1)PPAR．Y多克隆抗體：購白美國SantaCruz公司，編號Se．7273。(2)Tris、APS、SDS、TEMED、Tween．20、丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺、麗春紅購自美國sigma公司；SuperECLPlus超敏發(fā)光液、顯影液及定影液購自北京尚柏生物技術(shù)有限公司。5、Real．timePCR試劑(1)RNA裂解液TRIZOL：購白日本Takara公司(大連寶生物公司代理)20m1×2。(2)eDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒：購自日本Takara公司(大連寶生物公司代理)，編號DRR037s。內(nèi)容包括5xprimeSCriptTMBuf

7、fer(forRealTime)2009l、PrimeScriptmRTEnzymeMixI509l、oligodTPrimer(509M)509l、Random6mers(1009M)2009l、RNaseFreedH20lml、EASYDilution(forRealTimePCR)lml。(3)SYBR⑩PremixExT臼qTM(PerfectRealTime)：購自日本Takara公司(大連寶生物公司代理)，編號DDR04