舌癌細(xì)胞外泌體的分離鑒定及MicroRNA的表達(dá)譜分析

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1、分類號(hào):R782單位代碼:10159密級(jí):公開學(xué)號(hào):201521183碩士學(xué)位論文(口腔醫(yī)學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位)中文題目:舌癌細(xì)胞外泌體的分離鑒定及MicroRNA的表達(dá)譜分析英文題目:MicroRNAprofileexperssedintonguecancercells-derivedexosomes論文作者:趙騰飛指導(dǎo)教師:黃紹輝教授學(xué)科專業(yè):口腔醫(yī)學(xué)完成時(shí)間:2018年3月中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文舌癌細(xì)胞外泌體的分離鑒定及miRNA的表達(dá)譜分析MicroRNAprofileexperssedintonguecancercells-derivede

2、xosomes論文作者趙騰飛指導(dǎo)教師黃紹輝教授申請(qǐng)學(xué)位醫(yī)學(xué)碩士培養(yǎng)單位口腔醫(yī)學(xué)院一級(jí)學(xué)科口腔醫(yī)學(xué)二級(jí)學(xué)科口腔醫(yī)學(xué)研究方向口腔頜面外科論文起止時(shí)間2017年11月—2018年3月論文完成時(shí)間2018年3月中國(guó)醫(yī)科大學(xué)(遼寧)2018年3月Ⅰ中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要目的:分離并鑒定舌癌細(xì)胞上清液中的外泌體,利用生物信息學(xué)分析細(xì)胞上清液外泌體MicroRNA的測(cè)序結(jié)果。研究方法:試劑盒提取Tscca細(xì)胞上清液中的外泌體,透射電鏡觀察外泌體結(jié)構(gòu),通過(guò)納米顆粒跟蹤分析儀測(cè)定大小分布及濃度,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其標(biāo)記蛋白CD9和CD81。鑒定成功后,通過(guò)高通量

3、測(cè)序技術(shù)對(duì)細(xì)胞上清液外泌體MicroRNA的表達(dá)譜進(jìn)行研究,挑取富集的MicroRNA,用預(yù)測(cè)軟件行靶基因預(yù)測(cè)及其基因本體和京都基因與基因組百科全書信號(hào)通路富集分析。結(jié)果:從Tscca細(xì)胞上清液中分離出小于150nm的具有外泌體典型杯狀結(jié)構(gòu),表達(dá)外泌體標(biāo)記蛋白CD9和CD81,鑒定為外泌體。對(duì)細(xì)胞上清液外泌體測(cè)序結(jié)果篩選出的MicroRNA預(yù)測(cè)靶基因,共篩選出247條MicroiRNA序列,生物信息學(xué)結(jié)果顯示共有72條基因本體和46條信號(hào)通路與該實(shí)驗(yàn)MicroRNA測(cè)序結(jié)果有關(guān),顯著富集的基因本體以調(diào)控過(guò)程為主,進(jìn)一步通路分析后發(fā)現(xiàn)主要集中于細(xì)胞

4、的RNA轉(zhuǎn)錄、核糖體、嘌呤代謝、自噬、氧化磷酸化、EB病毒感染和代謝信號(hào)通路等過(guò)程,和腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。結(jié)論:本研究成功分離并鑒定了舌癌細(xì)胞上清液中的外泌體,外泌體中所包含的MicroRNA可能參與腫瘤的調(diào)控,這與外泌體的生物學(xué)功能相關(guān)。關(guān)鍵詞:舌癌;外泌體;MicroRNA課題資助:沈陽(yáng)市中青年科技創(chuàng)新人才支持計(jì)劃項(xiàng)目(RC170078)沈陽(yáng)市科技計(jì)劃項(xiàng)目(F-16-102-4-00)III中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文AbstractObjective:Theaimofthisstudywastoisolatedexosomesrelease

5、dbytounguecancercellsupernatantandanalysisexosomalMicroRNAexpressionprofoile.Methods:ExosomeswereisolatedfromTsccacellssupernatantbykitsandinspectedbyscanningelectronmicroscopy,quantifiedviananoparticletrackinganalysis,verifiedbyflowcytometrylabeledCD9andCD81,inthesemeansdida

6、preliminaryanalysisofthemorphologicalandmolecularbiologyoftheexosomes.TheexpressionprofilesofTsccacellsderivedexosomesMicroRNAwerestudiedbyhighfluxsequencingtechnology,thepotentialtargetsoftheMicroRNAwerepredicted.GeneOntologyandKyotoEneyclopediaofGenesandGenomesanalysiswerep

7、erformedtodeterminetheexosomesMicroRNA.Results:Thetypicalcup-shapedstructureoftheexosomeswasisolatedfromtheTsccacellsupernatant,whichwaslessthan150nm,andthemarkerproteinCD9andCD81wereexpressedasexosomes.WeanalyzedmicroRNAexpressioninexosomesfromTsccacells,intotal,247MicroRNAs

8、,bioinformaticalanalysisrevealedthat72GeneOntologytermsand46signalin

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