SNT1439-2004國境口岸埃博拉出血熱檢驗規(guī)程.pdf

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1、SN中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN/T1439-2004國境口岸埃博拉出血熱檢驗規(guī)程Examinationcodesforebolahemorrhagicfeveratfrontierport2004-06-01發(fā)布2004-12-01實施中華人民共和匡國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總IFRSN/T1439-2004月U青本標(biāo)準(zhǔn)的附錄C、附錄D為規(guī)范性附錄，附錄A、附錄B為資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由國家認證認可監(jiān)督管理委員會提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位:中華人民共和國海南出人境檢驗檢疫局、中華人民共和國天津出人境檢驗檢疫局。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:黃廷學(xué)、黃健民、關(guān)淳、吳波、黃春德。本標(biāo)準(zhǔn)為首次

2、發(fā)布的出人境檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。SN/T1439-2004國境口岸埃博拉出血熱檢驗規(guī)程范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了國境口岸埃博拉出血熱的檢驗對象、方法、結(jié)果報告程序及陽性結(jié)果的處置原則。本標(biāo)準(zhǔn)適用于國境口岸的埃博拉出血熱實驗室檢驗。2術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。2.1埃博拉出血熱ebolahemorrhagicfever由埃博拉病毒引起的一種對人類生命健康威脅極大的烈性傳染病。主要通過與病人及其排泄物等接觸傳染，也可通過氣溶膠傳播。3對象3.1找在人境人員中發(fā)現(xiàn)的埃博拉出血熱染疫人及染疫嫌疑人。靈長類動物(來自埃博拉出血熱地區(qū))。人體組織和器官(來自埃博拉出血熱地區(qū))。4標(biāo)本的采集和處

3、理4.1病人血清早期病人血液標(biāo)本(在發(fā)病3d內(nèi))及第二次血液標(biāo)本(在3周后)采集，冷藏條件下迅速送實驗室，當(dāng)日分離血清。如不能立即做細胞培養(yǎng)，血液標(biāo)本應(yīng)放人超低溫冰箱(-80'C)或液氮罐內(nèi)保存。4.2病人體液、排泄物采集病人體液、排泄物(包括尿液，精液，陰道、直腸、鼻腔、口腔、眼結(jié)膜分泌物)等在冷藏條件下迅速送至指定實驗室，做病毒分離或其他檢測用。4.3組織標(biāo)本采集死亡病例(靈長類動物)含有汗腺的皮下組織、肝臟、脾臟等，在冷藏條件下迅速送至指定實驗室，做病毒分離或其他檢測用4.4標(biāo)本標(biāo)識與實驗樣品轉(zhuǎn)運4.4.1標(biāo)本標(biāo)識采集的標(biāo)本應(yīng)進行標(biāo)識，連同相關(guān)記錄一并送實驗室4.4.2實驗樣

4、品轉(zhuǎn)運實驗樣品轉(zhuǎn)運過程應(yīng)遵循下列原則:—所有需要轉(zhuǎn)運的實驗樣品必須標(biāo)明“傳染性物質(zhì)，埃博拉病毒”;—短途運輸必須使用專車，由專人運送。盡可能避免長途轉(zhuǎn)運，如確需要空運的實驗樣品應(yīng)按照有關(guān)部門對傳染性物品運輸?shù)囊?guī)定辦理;—樣品的容器要使用能夠承受不少于95kPa壓力的高質(zhì)量的防水包裝材料并且密封，以防止運輸過程中發(fā)生內(nèi)容物的外泄;—第二層和第三層包裝中應(yīng)使用吸水性好的柔軟物質(zhì)充填;SN/T1439-2004—幾個易碎的容器在同一個包裹中運輸時，應(yīng)分別獨立包裝并相互隔離，以免相互碰撞。準(zhǔn)備常用儀器設(shè)備和器材參見附錄A，常用溶液及配制參見附錄B,檢驗方法埃博拉出血熱實驗室的檢驗方法如下:

5、—電子顯微鏡檢查;—埃博拉病毒抗原檢測;—病毒分離鑒定;—病毒核酸分子檢測;—特異性抗體檢測。檢驗方法的詳細內(nèi)容遵照附錄C,根據(jù)實驗室設(shè)備條件及技術(shù)力量，選擇使用上述檢驗方法，但其中應(yīng)包括病毒學(xué)檢驗和抗體檢測方法中一項至兩項。生物安全及防護措施埃博拉出血熱實驗室的生物安全及防護措施按照附錄D的規(guī)定操作。檢驗結(jié)果報告8.1電子顯微鏡檢查電鏡法檢查陽性，報告為“檢出絲狀病毒顆?！保瑧?yīng)采用免疫電鏡技術(shù)做進一步鑒定。8.2埃博拉病毒抗原檢測雙抗體夾心抗原捕獲ELISA法對(血液、尿液、及皮下組織懸液)標(biāo)本檢測陽性，報告為“埃博拉病毒抗原陽性”。8.3病毒分離鑒定將含病毒材料接種細胞培養(yǎng)，出

6、現(xiàn)明顯細胞病變，并經(jīng)間接免疫熒光法(UFA)鑒定證實，報告為“檢出埃博拉病毒”，可以確診。8.4病毒核酸分子檢測用反轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法從(病人或病獸標(biāo)本)中檢測到埃博拉病毒特異性GP基因，報告為“檢出埃博拉病毒特異性GP基因”，可以確診。8.5單份血清檢測單份血清標(biāo)本特異性壇M抗體1，40以上，報告為“埃博拉病毒壇M抗體陽性”，結(jié)合臨床表現(xiàn)具有診斷意義。8.6雙份血清檢測患者雙份血清特異性抗體檢測，恢復(fù)期血清抗體效價較急性期增高四倍及以上時，報告為“埃博拉病毒抗體陽性”，可以確診。8.7間接免疫熒光試驗(IFA)單份血清標(biāo)本1:64稀釋呈陽性或雙份血清效價增高四倍

7、及以上時，報告經(jīng)間接免疫熒光試驗證實為“埃博拉病毒抗體陽性”，可以確診.8.8免疫印跡試驗(IBT)待檢血清標(biāo)本經(jīng)免疫印跡試驗同時出現(xiàn)NP和VP30或NP和VP24顯色區(qū)帶，報告為“埃博拉病毒抗體陽性”，可以確診。SN/T1439-20049陽性結(jié)果的處t對病毒分離株及其他陽性結(jié)果的相應(yīng)標(biāo)本應(yīng)送有資質(zhì)的實驗室做復(fù)檢或鑒定。陽性結(jié)果應(yīng)及時向上級主管部門報告。SN/T1439-2004附錄A(資料性附錄)常用實驗設(shè)備和器材A.1實驗設(shè)備按照國際標(biāo)準(zhǔn)建設(shè)，并經(jīng)相關(guān)部門組織專