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《力學負荷對體外培養(yǎng)軟骨細胞及在體軟骨的影響》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、華中科技大學博士學位論文力學負荷對體外培養(yǎng)軟骨細胞及在體軟骨的影響姓名：李凱申請學位級別：博士專業(yè)：外科學（骨外）指導教師：楊述華;衛(wèi)小春20090401華中科技大學博士學位論文摘要第一部分力學因素對體外培養(yǎng)兔軟骨細胞糖胺多糖合成的影響實驗一原代和傳代兔關節(jié)軟骨細胞糖胺多糖合成的動態(tài)觀察目的研究傳代對體外培養(yǎng)兔關節(jié)軟骨細胞糖胺多糖（glycosaminoglycan，GAG）合成的影響。方法1月齡新西蘭兔5只，無菌手術切取雙膝關節(jié)軟骨，采用0.4%Pronase酶和0.025%II型膠原酶消化分離關節(jié)軟
2、骨細胞，體外培養(yǎng)。待細胞融合時，換無血清培養(yǎng)液。于換液后12、24、36、48、60h分別抽取上清液測量GAG濃度。傳代兩次，重復上述過程。采用重復測量資料的方差分析檢驗P0、P1、P2代細胞上清液液GAG濃度的差異。結果P2代以內(nèi)，軟骨細胞形態(tài)無明顯變化，但P2代細胞內(nèi)空泡狀顆粒增多。傳代后，細胞融合時間縮短，但是上清液GAG濃度隨傳代逐漸下降（P<0.001）,且P0、P1、P2代之間兩兩比較差異有顯著性（P<0.001）。換液60h后，P1代軟骨細胞GAG濃度較P0代下降24%，P2代較P0代下降
3、74%。換液后時間越長，上清液GAG濃度越大（P<0.001）。換液后時間與傳代之間存在交互效應，時間越長，傳代細胞與原代細胞上清液GAG濃度相差越大（P<0.001）。結論在體外單層培養(yǎng)條件下，原代軟骨細胞GAG合成能力最強，傳代后很快大幅下降。細胞融合后連續(xù)檢測上清液GAG濃度是研究軟骨細胞分化的有效方法。關鍵詞軟骨細胞；傳代；糖胺多糖；兔實驗二高密度細胞培養(yǎng)對兔關節(jié)軟骨細胞糖胺多糖合成的作用目的觀察不同接種密度下，軟骨細胞合成糖胺多糖的能力。材料與方法1月齡新西蘭兔5只。采用0.4%Pronase
4、酶和0.025%II型膠原酶消2華中科技大學博士學位論文化分離雙膝關節(jié)關節(jié)軟骨細胞，來源于同一只兔的軟骨細胞分為兩部分，一部分以2×104/cm2接種，傳代時仍以相同密度接種。另一部分在細胞貼壁后,人工降低細胞密度至2×103/cm2培養(yǎng)。倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)和增殖情況。原代和傳1代細胞于細胞融合后換液。換液后12，24，36，48，60h以改良Alcianblue染色沉淀法測定糖胺多糖質量濃度。結果原代高密度培養(yǎng)組關節(jié)軟骨細胞為多邊形,輪廓清晰，三四天即可見集落形成，集落周邊細胞較中心瘦長，為長多
5、邊形，傳1代細胞形態(tài)無明顯變化。低密度培養(yǎng)細胞早期散在分布，7d左右形成集落，細胞形態(tài)與高密度培養(yǎng)無明顯差異。原代低密度培養(yǎng)軟骨細胞長到融合所需時間較原代高密度培養(yǎng)細胞所需時間長。原代低密度培養(yǎng)組上清液中糖胺多糖質量濃度顯著低于原代及傳1代高密度培養(yǎng)組軟骨細胞（P<0.001，P<0.05），且時間越長，質量濃度相差越大。結論與低密度培養(yǎng)相比，平面高密度培養(yǎng)可提高軟骨細胞合成糖胺多糖的能力，明顯減緩軟骨細胞的失分化速度，提示高密度培養(yǎng)更有利于軟骨細胞維持表型，是軟骨平面培養(yǎng)的較好方式。關鍵詞軟骨細胞；傳
6、代；糖胺多糖；兔；關節(jié)軟骨實驗三不同強度循環(huán)拉伸對原代培養(yǎng)兔軟骨細胞糖胺多糖合成的影響目的研究不同強度的循環(huán)動態(tài)拉伸（Cyclictenislestrain，CTS）對原代培養(yǎng)的兔關節(jié)軟骨細胞糖胺多糖（glycosaminoglycan，GAG）合成的影響。方法1月齡新西蘭兔6只，無菌手術切取雙膝關節(jié)軟骨，采用0.4%Pronase酶和0.025%II型膠原酶消化分離關節(jié)軟骨細胞，來源于同一只兔的軟骨細胞分為3部分，分別接種3塊BioFlex培養(yǎng)板，通過Flexercell4000系統(tǒng)分別給予正弦波形、
7、0.3Hz、6h/d,強度分別為0%、5%、15%的CTS刺激。于加載后24、36、48、60h觀察細胞形態(tài)，并分別抽取上清測量GAG濃度。采用重復測量資料的方差分析比較不同強度CTS刺激組上清液GAG濃度的差異。結果細胞力學加載后可見周邊部軟骨細胞由多角形變?yōu)榧忓N形，沿培養(yǎng)皿半徑垂直方向排列。隨拉伸強度的增加，上清GAG濃度依次上升（P<0.001）,且經(jīng)兩兩比較有3華中科技大學博士學位論文顯著性差異（P<0.05）。隨時間增加，上清GAG濃度逐漸增加（P<0.001）。時間與加載條件之間存在交互效應
8、，時間越長，加載組與對照組上清GAG濃度相差越大（P<0.001）結論CTS可促進單層貼壁關節(jié)軟骨細胞合成GAG，作用效果隨拉伸強度增大而增加。關鍵詞軟骨細胞；循環(huán)動態(tài)拉伸；糖胺多糖；兔；關節(jié)軟骨第二部分大鼠膝關節(jié)負重與非負重區(qū)軟骨組織學對比分析目的觀察大鼠膝關節(jié)軟骨負重區(qū)與非負重區(qū)組織形態(tài)、基質蛋白多糖成分和II型膠原分布差異。方法Wistar大鼠5只，切取雙膝關節(jié)，固定，脫鈣，包埋，沿矢狀面整體切片，HE染色，PH值1.0和2.5阿爾新
