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1、碩士學(xué)位（畢業(yè)）論文不同鐮孢菌侵染玉米莖部的效能分析學(xué)位申請人：許苗苗指導(dǎo)教師：董金皋教授曹志艷副研究員學(xué)科專業(yè)：植物學(xué)學(xué)位類別：理學(xué)碩士授予單位：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)答辯日期：二〇一八年五月三十日分類號：Q945.8單位代碼：100861密級：公開學(xué)號：20152050046不同鐮孢菌侵染玉米莖部的效能分析AnalysisonInfectingEfficiencyofDifferentFusariumSpeciestoMaizeStem學(xué)位申請人：許苗苗指導(dǎo)教師：董金皋教授曹志艷副研究員學(xué)科專業(yè)：植物學(xué)學(xué)位類別：理學(xué)碩士授予單位：河北
2、農(nóng)業(yè)大學(xué)答辯日期：二〇一八年五月三十日摘要玉米鐮孢菌莖腐病是玉米生產(chǎn)上的重要病害，該病的發(fā)生不僅給玉米產(chǎn)業(yè)造成重大損失，嚴(yán)重影響了玉米的機(jī)械化收獲，而且病菌產(chǎn)生的毒素嚴(yán)重影響人與家畜的健康。玉米莖腐病病原組成復(fù)雜多變，侵染機(jī)制尚不明確，現(xiàn)階段對玉米莖腐病菌的研究大多局限于單一致病菌侵染。本研究利用ATMT技術(shù)將青色熒光蛋白（CFP,Cyanfluorescentprotein）標(biāo)記到禾谷鐮孢，并結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室之前獲得的綠色熒光蛋白標(biāo)記的層出鐮孢、紅色熒光蛋白標(biāo)記的擬輪枝鐮孢，將3種不同標(biāo)記的鐮孢菌單獨(dú)或者復(fù)合接種到玉米莖部，通過熒
3、光檢測和定量分析比較3者在侵染效能之間的差異，主要結(jié)果如下：1.采用重疊PCR方法改造質(zhì)粒pCAMBIA1300，獲得了帶有青色熒光蛋白基因的質(zhì)粒載體pCAMBIA1300-CFP-Kan，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化將CFP基因?qū)肓撕坦如犳呋蚪M中，通過PCR鑒定以及熒光檢測，獲得了31株青色熒光蛋白標(biāo)記的禾谷鐮孢轉(zhuǎn)化子，從中選擇了4株熒光信號較強(qiáng)的轉(zhuǎn)化子進(jìn)行了致病力鑒定，其中轉(zhuǎn)化子Fg9的致病力與野生型沒有明顯差異，另外3株轉(zhuǎn)化子的致病力明顯下降。2.選取致病性與野生型菌株沒有明顯差異的禾谷鐮孢轉(zhuǎn)化子Fg9，與本實(shí)驗(yàn)室前期獲得
4、的綠色熒光蛋白標(biāo)記的層出鐮孢以及紅色熒光蛋白標(biāo)記的擬輪枝鐮孢，單獨(dú)或復(fù)合接種到玉米莖基部，于接種后不同時(shí)間段取樣觀察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，3種鐮孢菌均能單獨(dú)侵染玉米莖部組織，但是在玉米莖部的擴(kuò)展能力差異較為明顯，其中接種層出鐮孢、擬輪枝鐮孢的莖部病變較為嚴(yán)重，接種禾谷鐮孢的癥狀較輕；3種鐮孢菌復(fù)合接種時(shí)，莖部病變癥狀較單獨(dú)接種擬輪枝鐮孢或禾谷鐮孢時(shí)嚴(yán)重。3.對接種部位進(jìn)行熒光觀察，發(fā)現(xiàn)層出鐮孢在侵染初期的24~48h，可在細(xì)胞間隙擴(kuò)展，沿寄主細(xì)胞壁延伸，72h后開始侵入細(xì)胞，侵染后期（120~144h）破壞植物細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，侵占細(xì)胞內(nèi)部；擬
5、輪枝鐮孢接種后72h在細(xì)胞間隙可出現(xiàn)明顯擴(kuò)展，而禾谷鐮孢96h時(shí)明顯擴(kuò)展。病菌定殖量分析結(jié)果顯示，在接種后24h層出鐮孢即可在玉米莖部定殖，后期菌量持續(xù)增加；擬輪枝鐮孢在接種后72h可以檢測到明顯的菌絲定殖量；禾谷鐮孢的定殖量早期較少，后期增多。復(fù)合接種的玉米莖部，層出鐮孢的侵染從接種后24h開始，其他兩株鐮孢菌的侵染較晚。4.初步探究了不同溫度（20℃，25℃和30℃）對3種鐮孢菌生長以及分生孢子萌發(fā)的影響。結(jié)果表明，禾谷鐮孢菌落生長的最適溫度為20~25℃，30℃時(shí)其生長明顯受到抑制；而層出鐮孢和擬輪枝鐮孢生長最適溫度為25
6、~30℃，兩者卻對低溫較為敏感，在20℃生長緩慢且氣生菌絲較少。孢子萌發(fā)試驗(yàn)結(jié)果顯示，3h時(shí)層出鐮孢和擬輪枝鐮孢的孢子萌發(fā)速率隨溫度升高而升高，禾谷鐮孢的分生孢子萌發(fā)率隨溫度升高有所降低。關(guān)鍵字：層出鐮孢；擬輪枝鐮孢；禾谷鐮孢；農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化；熒光標(biāo)記AnalysisonInfectingEfficiencyofDifferentFusariumspeciestoMaizeStemMasterCandidate：XUMiaomiaoMajor：BotanySupervisors：DONGJingaoCAOZhiyanAbs
7、tractCornstalkrotcausedbyFusariumspp.isanimportantdiseaseincornproduction.Theoccurrenceofthisdiseasenotonlycausesseriouslossestothecornindustry,butalsoseriouslyaffectsthemechanizedharvestingofcorn.Thetoxinsproducedbythebacteriaseriouslyaffectthehealthofhumansandlives
8、tock.Thepathogeniccomponentsofcornstalkrotarecomplexandchangeable,andthemechanismofinfectionisnotyetclear.Butduringthisperiod,there
