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《酸敏感離子通道阻斷劑阿米洛利對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)軟骨的保護(hù)作用及部分機(jī)制研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文酸敏感離子通道阻斷劑阿米洛利對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)軟骨的保護(hù)作用及部分機(jī)制研究姓名：張騰躍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：藥理學(xué)指導(dǎo)教師：陳飛虎20100501安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文酸敏感離子通道阻斷劑阿米洛利對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)軟骨的保護(hù)作用及部分機(jī)制研究研究生張騰躍導(dǎo)師陳飛虎教授（安徽醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，合肥，230032）中文摘要目的：闡明酸敏感離子通道阻斷劑阿米洛利（Amiloride）對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎（adjuvantarthritis，AA）大鼠關(guān)節(jié)軟骨的保護(hù)作用；從軟骨細(xì)胞凋亡的角度，研究Amiloride對(duì)AA大鼠關(guān)節(jié)軟骨的保護(hù)作用可能的環(huán)節(jié)；通過(guò)檢測(cè)Ami
2、loride對(duì)AA大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞外游離鈣離子濃度、鈣離子依賴的凋亡相關(guān)酶類表達(dá)的變化，分析Amiloride抑制AA大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡可能的作用機(jī)制。方法：將大鼠隨機(jī)分為正常組、AA模型組、Amiloride（2.5、5.0、10.0mg·kg-1·d-1）組和阿司匹林（50mg/kg）對(duì)照組。弗氏完全佐劑(CFA)致AA后第10天，大鼠出現(xiàn)繼發(fā)性炎癥，此時(shí)Amiloride、阿司匹林灌胃給藥，連續(xù)8d；正常組與模型組給予等容量的無(wú)菌注射用水。檢測(cè)大鼠繼發(fā)側(cè)關(guān)節(jié)腫脹度變化，光學(xué)顯微鏡觀察關(guān)節(jié)病理變化，免疫組織化學(xué)技術(shù)測(cè)定Amiloride對(duì)AA大鼠關(guān)節(jié)軟骨中的Ⅱ型膠原（COII）蛋白
3、合成的影響，Alcian染色測(cè)定Amiloride對(duì)AA大鼠關(guān)節(jié)軟骨中的蛋白多糖（PG）合成的影響，透射電鏡、Tunel法觀察Amiloride對(duì)AA大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡的影響。膠原酶-胰蛋白酶消化法分離培養(yǎng)關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞，胞外酸化誘導(dǎo)建立AA大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡體外模型，TUNEL染色及PI單染2+色法觀察AA大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的凋亡，鈣離子成像技術(shù)檢測(cè)[Ca]i水平，免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)AA大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞calpain、calcineurin、iNOS的表達(dá)。結(jié)果：1.酸敏感離子通道阻斷劑阿米洛利（Amiloride）對(duì)AA大鼠關(guān)節(jié)軟骨的保護(hù)作7安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文用Amilori
4、de各劑量組對(duì)AA大鼠炎癥繼發(fā)側(cè)關(guān)節(jié)足腫脹未見(jiàn)明顯影響；病理學(xué)觀察關(guān)節(jié)軟骨表面光滑，軟骨細(xì)胞層次尚清晰，成熟軟骨細(xì)胞數(shù)量增加；免疫組化及Alcian染色檢測(cè)顯示關(guān)節(jié)軟骨基質(zhì)成分COII蛋白和PG的表達(dá)量增加。2.酸敏感離子通道阻斷劑阿米洛利（Amiloride）對(duì)AA大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡的影響體內(nèi)實(shí)驗(yàn)透射電鏡觀察Amiloride各劑量組軟骨細(xì)胞核內(nèi)異染色質(zhì)輕度邊集、細(xì)胞內(nèi)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴(kuò)張、線粒體輕度腫脹，與模型組軟骨細(xì)胞核膜皺縮、核染色質(zhì)高度邊集、核膜破裂、出現(xiàn)凋亡小體相比無(wú)明顯細(xì)胞凋亡的特征；Tunel法原位檢測(cè)顯示凋亡陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著減少(P<0.01)。體外實(shí)驗(yàn)PI染色發(fā)現(xiàn)Ami
5、loride各給藥組及PcTx1組細(xì)胞凋亡率與模型組相比明顯降低；Tunel法原位檢測(cè)顯示Amiloride各劑量組及PcTx1組凋亡陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)減少。3.酸敏感離子通道阻斷劑阿米洛利（Amiloride）對(duì)AA大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞游離2+鈣(ionizedfreecalcium,Ca)水平及鈣離子依賴性的凋亡相關(guān)酶類表達(dá)的影響2+鈣成像結(jié)果顯示Amiloride及PcTx1給藥劑量組胞質(zhì)CaF340/F380比值相對(duì)于模型組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯示Amiloride組鈣離子依賴性的凋亡相關(guān)酶類calpain、calcineurin、iNOS的表達(dá)明顯降低(P<0.01)。結(jié)
6、論：1.在佐劑性關(guān)節(jié)炎中，ASICs阻斷劑Amiloride，對(duì)其炎癥反應(yīng)并無(wú)明顯的抑制作用，而對(duì)軟骨細(xì)胞及細(xì)胞外基質(zhì)有保護(hù)作用。酸敏感離子通道阻斷劑阿米洛利（Amiloride）對(duì)AA大鼠關(guān)節(jié)軟骨有保護(hù)作用。2.酸敏感離子通道阻斷劑阿米洛利（Amiloride）對(duì)于AA大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞以及經(jīng)胞外酸化處理的體外培養(yǎng)的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的凋亡均有抑制作用。Amiloride是通過(guò)阻斷ASICs來(lái)抑制AA大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的凋亡，從而發(fā)揮對(duì)AA大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的保護(hù)作用的。2+3.酸敏感離子通道阻斷劑阿米洛利（Amiloride）對(duì)[Ca]i的升高以及鈣離子依賴性的凋亡相關(guān)酶類calpain、cal
7、cineurin、iNOS的表達(dá)有抑制作用。Amiloride2+對(duì)于AA大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的凋亡的抑制有可能是通過(guò)阻斷ASICs，抑制Ca8安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文超載，從而抑制鈣離子依賴性的凋亡相關(guān)酶類calpain、calcineurin、iNOS的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。關(guān)鍵詞：酸敏感離子通道；Amiloride；佐劑性關(guān)節(jié)炎；軟骨細(xì)胞；凋亡；9安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文AcidsensingionchannelsblockerAmilo
