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《可溶性豬軟骨ⅱ型膠原蛋白的提取與鑒定》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、954重慶醫(yī)學(xué)2011年4月第4O卷第1O期·論著·可溶性豬軟骨Ⅱ型膠原蛋白的提取與鑒定寧志剛，王富友，崔運(yùn)利，熊娟，楊柳△(第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院關(guān)節(jié)中心，重慶400038)摘要：目的從豬膝關(guān)節(jié)軟骨中提取純化Ⅱ型膠原蛋白，并對其進(jìn)行鑒定。方法選擇豬膝關(guān)節(jié)軟骨為提取原料，用鹽酸胍去除蛋白多糖、胃蛋白酶兩步消化、氯化鈉鹽析、超純水透析、離心濃縮等方法提取純化Ⅱ型膠原蛋白；采用SDS-PAGE、氨基酸成分分析對提取的Ⅱ型膠原蛋白進(jìn)行鑒定；利用凍干的方法計算提取的濃度。結(jié)果SDS-PAGE電泳結(jié)果顯示提取的Ⅱ型膠原蛋白分子量約120kD；氨基酸成分分析顯示甘氨酸、脯氨酸和丙氨
2、酸含量最高，并且可以檢出羥脯氨酸、羥賴氨酸，符合Ⅱ型膠原特征；該法提取的Ⅱ型膠原蛋白濃度為66mg／mL。結(jié)論從豬關(guān)節(jié)軟骨提取的Ⅱ型膠原蛋白純度高，方法簡便，提取的膠原蛋白濃度更高。關(guān)鍵詞：II型膠原蛋白；軟骨；電泳，聚丙烯酰氨凝膠doi：10．3969／j．issn．1671—8348．2011．10．008文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1671—8348(2011)10—0954—02IsolationandidentificationofsoluablecollagentypeIIfromporcinearticularcartilageNingZhigang，Wan
3、gFuyou，CuiYunli，XiongJuan，YangLiu(TheCenterofJointSurgery，SouthwestHospital，Chongqing400038，China)Abstract：0bjectiveToisolateandpurifycollagentypeⅡfromporcinearticularcartilageandidentifyitspurity．MethodsTheporcinearticularcartilagewasselectedasrawmateria1．Guanidinehydrochloridewaschose
4、ntowithdrawtheproteoglycans．Two-stepdigestionofpepsin，saltingofsodiumchloride，dialyzingofultrapurewater，centrifugeenrichmentwereappliedforextracting；TheidentificationwasdonebySDS-PAGEandaminoacidanalysis；TheconcentrationofextractedcollagentypeⅡwasmeasuredbycool—dry．ResultsItwasfoundthat
5、themolecularweightofextractedcollagentypeI1wasabout120KDbySDS-PAGE；Thecontent0fGLY，PROandALAwerehighestbyaminoacidanalysis，andHypro，Hylsycanbedetected。whichaccordedwiththecharacter—isticsofcollagentypeⅡ；theconcentrationofextractedcollagentypeUwas66mg／mlbycool-dry．ConclusionTheresultssug
6、gestthattheextractedcollagentype11hasthehighpurityandconcentrationwithamoreconvenientmethod．Keywords：collagentypeII；cartilage；ecectrophoresis，polyacrylamidegelⅡ型膠原蛋白(collagentypelI，CⅡ)是軟骨基質(zhì)的主要節(jié)收集透明軟骨，剝?nèi)ス悄?，生理鹽水洗凈瀝干后切成薄片，1O有機(jī)成分，是關(guān)節(jié)軟骨的主要結(jié)構(gòu)蛋白。近年有研究表明，類倍體積4mol／L鹽酸胍(pH7．5，0．05mol／LTris—HCI配制)
7、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病與Ⅱ型膠原蛋白自身免疫反應(yīng)有關(guān)r1]，混懸，勻漿機(jī)粉碎，8O目鋼篩過濾，于4℃下攪拌48h，4℃、12美國、英國、法國、中國等國家正在進(jìn)行Ⅱ型膠原蛋白治療類風(fēng)000r／rain離心30min。沉淀用0．05mol／LTris-HCl緩沖液濕性關(guān)節(jié)炎的動物及Ⅱ～Ⅲ期臨床實驗研究_3]，因此，Ⅱ型膠和0．5mol／L乙酸充分洗滌后，用5倍體積的胃蛋白酶消化液原蛋白的提取純化與鑒定具有較大價值。國外的Ⅱ型膠原蛋(O．5mol／L乙酸配成1g／L)混懸，4℃下攪拌48h。同上離白價格昂貴，國內(nèi)報道的提取方法條件不一，操作復(fù)雜。本研心，收集上
