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1、基因診斷與 基因治療基因診斷的概念基因是遺傳學上的一個概念，是在染色體上占有一定的位置，表現(xiàn)一定功能的基本單位基因的物質基礎是脫氧核糖核酸（DNA）（有些病毒的基因是核糖核酸，RNA）基因診斷是指運用現(xiàn)代分子生物學和分子遺傳學方法檢查基因的結構及其表達產物，是目前診斷技術中最具發(fā)展前途的技術?；蛟\斷的分子生物學基礎基因診斷操作的對象為基因或其片段運用現(xiàn)代分子生物學和分子遺傳學方法，檢查特定基因的存在與否、基因的結構及其表達功能是否正常等，從而確定：是否患有某種遺傳?。撼赡耆诉z傳型分析，產前診斷是否患有某些特定的微生物感染疾病是否患有某種腫瘤，對腫瘤病人的預后進行分析基因配型，用于移
2、植、輸血等法醫(yī)學上，分析犯罪現(xiàn)場的證實與嫌犯的鑒別基因診斷的途徑檢查是否存在特定的DNA或RNA，用于微生物感染的診斷基因突變的檢測限制性內切酶酶譜分析等位基因特異性寡核苷酸探針雜交法基因連鎖分析限制性片段長度多態(tài)性分析(RFLP)基因的單堿基多態(tài)性分析(SNP)基因轉錄產物mRNA檢測基因型的鑒定與比較基因診斷的對象1、病原生物的侵入：一般侵入體內的病原生物可通過顯微鏡檢查各免疫學方法進行診斷。直接檢測病原生物的遺傳物質提高診斷的敏感性2、先天遺傳性疾患：已有多種傳統(tǒng)的遺傳性疾患的發(fā)病原因被確定為特定基因的突變。例如：苯丙氨酸羥化酶基因突變可引起苯丙酮尿癥：腺苷脫胺酶基因突變可引起
3、重癥聯(lián)合免疫缺陷癥（SCID)；而淋巴細胞表面分子CD40或其配體（CD40L）基因突變則可引起無丙種球蛋白血癥。用基因診斷的方法檢測其基因突變利于確診和治療方案的建立3、后天基因突變引起的疾病：腫瘤。腫瘤的發(fā)生是由于個別細胞基因突變而引起的細胞無限增殖?；蛟\斷可確定抑癌基因發(fā)生突變還是癌基因發(fā)生突變4、其它：如DNA指紋、個體識別，親子關系識別，法醫(yī)物證等基因診斷的運用一是通過檢測特定基因或相關疾病基因的存在以判斷和評估某疾病在某一個體上發(fā)生某疾病的風險，以導向預防這種疾病的發(fā)生二是通過基因診斷促使個性化藥物的誕生三是通過基因診斷更精確判斷某些傳染性疾病或腫瘤等疾病的存在，以有利
4、于臨床醫(yī)生盡早確定病因基因診斷技術不僅在疾病檢測上具有重要意義，而且在婚前檢查，親子鑒定等人類生活方面具備廣闊運用前景基因診斷的方法PCR核酸雜交基因芯片(chip)擴增片段長度多態(tài)性(Amp-FLP)等位基因的特異寡核苷酸探針診斷法(ASO)單鏈構象多態(tài)性診斷法(SSCP)PCR技術的發(fā)明及特點1985年Saiki首次用以擴增β珠蛋白基因標志PCR技術的問世。PCR技術具有簡便、快速、特異和靈敏等特點，它用于基因診斷，使之發(fā)生了革命性的變化。PCR技術可使待測樣品中的目的基因片段在幾小時內，甚至十幾秒內擴增百萬倍，如果標本中原來的目的基因達到fg級水平，就可以通過簡單電泳和溴化乙啶
5、(EB)顯示擴增后的核酸片段區(qū)帶。從檢測區(qū)帶的電泳位置看它是否符合引物設計的擴增長度。PCR技術的進展PCR-Southern印跡模板檢測靈敏度可達ag級水平(可查出幾個病毒的存在)則能看到雜交帶。特點：特異性強，但操作費時間，一次需3d，這使急于根據(jù)檢測結果決定治療措施的臨床醫(yī)生迫不及待。套式PCR是指在用第一對引物(外引物)擴增之后，加入另一對位于外引物內側的內引物，再行擴增數(shù)十個循環(huán)，這可將標志檢測時間壓縮8-10h，第2日便可獲得高敏感性的檢查結果。其敏感性大致與PCR-Southern印跡相當。PCR的微量化反應體積減少至10-20μl，降低了PCR檢測的成本。在1次PCR
6、中加入多對引物，可用于病毒、細菌等的分型和多種病原體基因的檢測。PCR擴增產物，用專為檢測雙鏈DNA而設計的微量熒光計定量，就可從標準模板DNA的量或拷貝數(shù)達到PCR定量的目的。取樣技術的改進對于產前診斷，初期是取羊水細胞，需進行細胞培養(yǎng)。從1982年起采取妊娠8-12周的絨毛DNA作產前診斷使產前基因診斷的時間提前。由于PCR技術的應用，甚至在胚胎植入前(受精6d)也可作產前診斷。反向遺傳學策略過去尋找致病基因是從經典遺傳學思路出發(fā)，先發(fā)現(xiàn)疾病的表現(xiàn)改變，再經過不同方法由表型追溯到基因。近幾年來發(fā)展起來的“反向遺傳學”(reversegenetics)在策略上解決了經典遺傳學所不能
7、解決的這個難題。在不知道和不必知道基因產物或表型的情況下分離和定位致病基因，并由它的一級結構推出產物的氨基酸序列。方法：須先采用細胞遺傳學方式或RFLP連鎖分析確定致病基因在染色體上的大概位置，然后采用染色體步移（chromosomewalking）或染色體跳躍（chromosomehopping）技術逐漸接近，最后找到的基因的準確位置。成功例子：如Duchenne肌營養(yǎng)不良和囊性纖維變等致病基因的發(fā)現(xiàn)；預計亨廷頓舞蹈病、神經纖維瘤、多發(fā)性腸息肉和成人型多
