靈芝多糖對小鼠細(xì)胞免疫功能調(diào)節(jié)作用的實(shí)驗(yàn)研究

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1、維普資訊http://www.cqvip.com微生物學(xué)雜志2003年3月第23卷第2期JOURNALOFMICROBIOLOGYMar．2003Vo1．23No．251·研究報告·靈芝多糖對小鼠細(xì)胞免疫功能調(diào)節(jié)作用的實(shí)驗(yàn)研究江振友，林晨(暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)與免疫學(xué)教研室，廣東廣州510632)摘要研究靈芝多糖(G)對小鼠細(xì)胞免疫功能調(diào)節(jié)作用的影響。實(shí)驗(yàn)小鼠分成4組，分別經(jīng)胃灌注不同劑量(高、中、低)靈芝多糖，每天1次，連續(xù)14d，對照組小鼠用以等量蒸餾水代替。分別于實(shí)驗(yàn)第15，28d進(jìn)行小鼠細(xì)胞免疫功能調(diào)節(jié)作用的測試。靈芝多

2、糖喂藥后2周，3個劑量組小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞對雞血紅細(xì)胞的吞噬百分率和吞噬指數(shù)；低劑量組小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)、小鼠碳廓清；高荊量組小鼠NK細(xì)胞活性和對照組比較均有顯著性差異(P<0．05)。喂藥后4周：上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果和對照組比較均無顯著性差異(P>0．05)。結(jié)果提示靈芝多糖能提高小鼠的非特異性和特異性細(xì)胞免疫功能。關(guān)鍵詞靈芝多糖；細(xì)胞免疫；遲發(fā)型超敏反應(yīng)；淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)中圈分類號R979．5文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號1005—7021(2003)02—0051—04靈芝多糖(GanodermaLucidum

3、polysaccha．(NAD)1．3×10一mol／L。將上述試劑溶于0．2rides)系靈芝[GanodermaLucidum(Leyss．exFr．)mol／L的Tris．HCl緩沖液中(pH8．2)。Karst]的主要有效成分，現(xiàn)代藥理研究表明，靈芝1．1．3實(shí)驗(yàn)動物和細(xì)胞NIH小鼠，6～8周齡，具有多方面的生物活性和藥理作用。靈芝多糖具每只(20±2)g，廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。有免疫增強(qiáng)和抗腫瘤作用【1,2J。近年來，靈芝的Yac．1，中山醫(yī)科大學(xué)動物中心提供。藥理研究己進(jìn)入細(xì)胞、分子乃至基因水平。本文1．2方法旨

4、在整體條件下，研究觀察靈芝多糖對小鼠脾淋1．2．1實(shí)驗(yàn)分組小鼠隨機(jī)分為4組，每組30巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)、NK細(xì)胞活性、DTH、碳廓清試只。即對照組(CK)、靈芝多糖高濃度組(HD)、中驗(yàn)、腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)的影響，以探濃度組(MD)和低濃度組(LD)；用蒸餾水溶解稀討靈芝多糖對小鼠細(xì)胞免疫功能的調(diào)節(jié)作用，為釋靈芝多糖(G)，每組均按0．5mL／只灌胃。靈芝的免疫增強(qiáng)和抗腫瘤作用、滋補(bǔ)強(qiáng)壯、扶正固高、中、低濃度組小鼠灌胃靈芝多糖劑量分別為本作用提供理論依據(jù)。2．15mg／只、0．65mg／5~、0．22mg／只；CK組同時以蒸

5、餾水0．5mL／只灌胃。每日1次，連續(xù)21材料與方法周，于15d每組取20只小鼠進(jìn)行細(xì)胞免疫功能1．1材料調(diào)節(jié)作用測試，其余10只動物于第15d起停止1．1．1主要藥品試劑靈芝多糖G，按文獻(xiàn)給予受試物，正常喂養(yǎng)至第28d進(jìn)行細(xì)胞免疫功[3，4]方法提取，化學(xué)組成是以葡萄糖、半乳糖為能測試。主的雜多糖，糖苷鍵連接方式以B(1—4)為主，稍1．2．2小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)(MTT)無菌多口(1—6)，相對分子質(zhì)量9000；RPMI1640細(xì)胞取脾，將脾撕碎，經(jīng)200目篩網(wǎng)過濾，用Hanks液培養(yǎng)液為Hyclone產(chǎn)品，小牛血清為Gib

6、co公司產(chǎn)洗3次，調(diào)整細(xì)胞濃度為2×10個／mL。加入24品。2．巰基乙醇、刀豆蛋白A(ConA)、MTT、二硝孔培養(yǎng)板中，每孔1mL，一孔加濃度為100g／基氟苯(DNFB)為sigma公司產(chǎn)品；INT、PMS為mL50LConA液(相當(dāng)于5／~g／mL)，另一孔不fluka公司產(chǎn)品；NAD為se1"va公司產(chǎn)品；印度墨加ConA作為對照，置5％co2，37℃培養(yǎng)72h。水(英國產(chǎn))。培養(yǎng)結(jié)束前4h，每孔輕輕吸去上清液0．7mL，加1．1．2LDH基質(zhì)液乳酸鋰5×10吒mol／I．；硝入0．7mL不含小牛血清的RPMU640培養(yǎng)

7、液，同基氯化四氮唑(INT)6．6×10mol／I．；吩嗪二甲時加入M1vr(5g／L)50L／孑L，繼續(xù)培養(yǎng)4h后，酯硫酸鹽(PMS)2．8×10叫mol／L；氧化型輔酶I每孔加入1n酸性異丙醇，完全溶解紫色結(jié)晶收稿日期：2003—01—24作者簡介：江振友男，剮教授?，F(xiàn)從事病毒致病與免疫的分子生物學(xué)研究。維普資訊http://www.cqvip.com微生物學(xué)雜志23卷后分裝到96孔板中，每孔分裝4孔作為平行樣，入生理鹽水2mL。然后吸出腹腔洗液1mL，平用酶聯(lián)免疫檢測儀，以570nm波長測定光密度均滴于2片載玻片上，37℃3

8、0min。生理鹽水漂值。采用單因素方差分析比較各試驗(yàn)組與對照組洗除去未貼片細(xì)胞。1：1丙酮甲醇溶液固定，體的差異。用加ConA孔的光密度值減去不加積比4％Giemsa．磷酸緩沖液染色3min，漂洗晾ConA孔的光密度值代表淋巴細(xì)胞的增殖能力。干。采