靈芝多糖的提取及對(duì)小鼠免疫功能影響的研究

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1、維普資訊http://www.cqvip.com第2l卷湖北師范學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)Vo【2l第3期JournalofHubeiNormalUniversity(Natura【8cience)NO．3．200l靈芝多糖的提取及對(duì)小鼠免疫功能影響的研究董昌金(湖北師范學(xué)院生物系．湖北黃石435002)摘要：研究靈芝多糖的提取方法和多糖對(duì)小鼠免疫功能的影響．蛄果表明：每天灌胃o．5或10g／kg體重更芝多棒(GLP)，連續(xù)25天．可日月顯促進(jìn)小鼠特異性抗體的形直，促進(jìn)小鼠巨噬知胞的吞噬功能，增加外同血T淋巴細(xì)胞數(shù)量．建

2、緩胸腺萎縮，并可對(duì)抗由CY所致的細(xì)胞免疫和惟液免疫低下的作用美毽詞：曼芝；多糖；提?。幻庖吖δ苤腥Ψ诸愄?hào)；Q53文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：l009—2714(2001)03—0072—03靈芝(Ganodermalucidum)是一種名貴的藥用真菌，藥理實(shí)驗(yàn)證明靈芝多糖D能增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬能力，促進(jìn)血清、肝和骨髓蛋白質(zhì)合成．促使制造B細(xì)胞的骨髓RNA和DNA的合成．多糖BNC能增強(qiáng)T細(xì)胞增生，a一和葡聚糖、GI～l雜聚糖和酸性雜聚糖、三種多糖蛋白抑制Sarcoma180生長(zhǎng)，GanoderanA、B和c降低原生質(zhì)葡萄

3、糖水平．水解性多糖有強(qiáng)心作用。三萜化合物中，GanodericacidB、C、Mf和X．GandoermicacidO、Q、R、S和T—o抑制膽固醇合成，GanodericacidC和D抑制組胺釋放，GanodericacidR和s有強(qiáng)烈的抗病毒作用。蛋白質(zhì)IZ一8促進(jìn)淋巴細(xì)胞分裂，具有免疫活性。靈芝的總生物堿擴(kuò)張心臟冠狀動(dòng)脈，增加冠狀動(dòng)脈血流，減少冠狀動(dòng)脈阻力和心肌氧消耗．其中r一三甲胺基丁酸抗缺氧和增加冠狀動(dòng)脈血流量。1材料①赤芝(來(lái)自廣東微生物所)②小鼠選用LACA種，20+0．5g雌雄各半；胚鼠，取新鮮血清，

4、1：10稀釋，作補(bǔ)體用(小鼠、胚鼠均來(lái)自廣東藥學(xué)院病理研究室)③雞紅細(xì)胞(Chickenredbloodcell，CRBC)成年公雞，心臟取血按1：5比例于滅菌的Alsevers液中，置冰箱保存．同時(shí)配成7的雞紅細(xì)胞懸液．每鼠腹腔注射0．2ml免疫。④藥物與試劑環(huán)磷酰胺(cyclophsphamide，CY)、糖原(Glycogen)、醋酸一1一萘酯(1一Naphthy【acetate2方法2．1夏芝菌絲體的培養(yǎng)采用液體深層發(fā)酵培養(yǎng)。玉米粉1、葡萄糖2、酵母粉0．5、KHPO0．1、MgSO0、075、pH4．5-5

5、．0。溫度30c通氣量以1：1～1：0．5為宜．接種量為5～lO，放罐標(biāo)準(zhǔn)為：①菌絲體含量1j一2o(濕重)；②發(fā)酵液pH值為2．5—3．0：@氣味清香，殘?zhí)?．1左右；④菌絲體形態(tài)，菌絲衰收蔫日期200]一D3l8作者筒介-董昌壘(1963)．男．碩士、講師·72·維普資訊http://www.cqvip.com老，少數(shù)自溶，無(wú)鎖肽聯(lián)合；⑤培養(yǎng)時(shí)間4—7天。。2．2靈芝多糖(GLP)的提取。本研究按lg(3)‘正交設(shè)計(jì)，用靈芝菌絲體和子實(shí)體作材料，采用熱水授提法，按表1中實(shí)驗(yàn)號(hào)、加水量、提取時(shí)間、提取次數(shù)、提取菌絲

6、體和子實(shí)體，提取液合并后蒸發(fā)濃縮，再加相應(yīng)濃度的乙醇，靜止過夜，過濾得多糖粗品，再重復(fù)用相應(yīng)濃度乙醇提取，可得濃度較高的多糖精品。表l實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)2．3取體重2O±0．5g小鼠180只，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)組每天灌胃GIP0．5mL／只，對(duì)照組每天灌胃蒸餾水0．5mI／只，連續(xù)25天，并按下面分四個(gè)大組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。2．3．1取5O只小鼠分五個(gè)小組，培養(yǎng)第l5天時(shí)，用CRBC進(jìn)行免疫。CY及GIP+CY組同時(shí)腹腔注射(160mg／kg)，10天后用溶血素測(cè)定法“測(cè)每小組IgM抗體生成情況，以光密度(O．D)表示。2．3．2取3

7、0只小鼠分三個(gè)小組，培養(yǎng)第16天后試驗(yàn)組每天腹腔注射糖原2．5ml(濃度0．3)。4天后取腹腔巨噬細(xì)胞加定量的CRBC。一起孵化、制片、鏡檢，每片計(jì)數(shù)100個(gè)巨噬細(xì)胞，測(cè)定其吞噬百分率及吞噬指數(shù)。2．3．3取50只小鼠分成5個(gè)小組．采用酸性萘酯酶(ANAE)反應(yīng)法測(cè)定小鼠外周血T淋巴細(xì)胞的數(shù)量，以ANAE陽(yáng)性細(xì)胞百分率表示。2．3．4取50只小鼠分5個(gè)小組，GIP灌胃25天后處死，摘取胸腺及脾臟、稱重，觀察GIP對(duì)其重量的影響。3結(jié)果3．1靈芝多糖(GIP)的提取本研究按I檀(3)正交設(shè)計(jì)，用靈芝菌絲體和子實(shí)體作材料

8、，采用熱水浸提法，研究表明，靈芝多糖較理想提取工藝為：加水30—40倍，熱水浸提3次，每次授提1小時(shí)，醇析乙醇濃度為85，采用蒽酮比色法測(cè)定多糖含量“：，快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，便于工廠推廣和應(yīng)用。3．2GI，P對(duì)正常及CY小鼠體液免疫的影響表2GLP對(duì)正常爰CY小鼠體液免疫的影響與對(duì)照組比，*P<0OOl；與CY組比．**P<0．001由表2可知，