銀耳多糖及其抗腫瘤活性的研究

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1、維普資訊http://www.cqvip.comVo1．3No．3‘天然產(chǎn)物研究與開發(fā))一九九一年九月銀耳多糖及其抗腫瘤活性的研究(I)高其品張大軍劉平李丙川(吉林省中醫(yī)中藥研究院長春130021)摘要銀耳子實體熱水提取物經(jīng)乙醇沉淀、乙酸銅分部及DEAE-纖維素柱層析，得五個多糖部分(BI—BV)，進行了組成糖分析，測定了它們對離體Hela細胞的殺傷作用。對癌細胞有一定殺傷作用的BII部分進行了進一步的分離純化，從中得到四個多糖級分(BII-l一4)。通過凝膠柱層析，醋酸纖維素薄膜電泳，汪明BII一1，BII一3為純化多糖，它們的分子量分別為100萬和8萬，BII-1是由半乳糖和半乳糖醛酸組

2、成，在銀耳中，尚未有這類多糖的報道．關鍵詞銀耳，多糖，抗癌作用銀耳(TremellafuciformisBerk)公司出品。在我國有悠久的藥用和食用歷史。近年=、方法來，對銀耳的化學成分及藥理活性進行了許多研究。其子實體熱水提取物具有增強1．粗多糖的制備免疫、抗?jié)兒涂狗派涞茸饔谩?。對小鼠銀耳(2000g)以水煎煮三次，煎煮肉瘤S一180盼生長有一定抑制作用【。目液濃縮后以三倍量95％乙酵沉淀，放置過前已由其子實體中分離純化出葡聚糖、中夜，抽濾，沉淀減壓干燥，得銀耳粗多性雜多糖、酸性雜多糖，并研究了它們的糖。-粗多糖(150g)，溶于1000ml0．1N結構和抗腫瘤活性【?！俊尽繛殚_發(fā)它的

3、藥J氫氧化鈉溶液中，攪拌下，加入等體積價值，我們對其所含的多糖成分，以抗腫7％乙酸銅溶液，80℃保溫1小時，放置瘤活性為指標，進行了篩選和結構研究。過夜，離心(4500rpm)20分，沉淀以本文報道了銀耳多糖的分離純化、分析鑒5％鹽酸一乙醇溶液洗至無色，繼用95％乙定及對離體Hela細胞的殺傷作用研究。醇洗至中性，抽濾后，沉淀在6O℃減壓干燥，得多糖A部分(8．5g)。離心后所得材料和方法的上清液中加入5倍量95％乙醇，放置過夜后抽濾，所得的沉淀用5％鹽酸一乙醇液一、材料洗至無色，繼用95％乙醇洗至中性，減壓銀耳購自市場，福建省產(chǎn)。DEAE=干燥得多糖B部分(78．9g)纖維素為上海試劑二廠

4、產(chǎn)品，Sepharose2．離子交換及凝膠柱層析。。4B，6B為Pharmacia公司生產(chǎn)，DoweXB部分10g溶于500ml蒸餾水中，進lx8anionexchangeresin為Dol化學行DEAE-纖維素(OH一)柱層析(1l收稿日期：1991年4只18日維普資訊http://www.cqvip.com44VO1．3NO．360cm，巾：8cm)，控制流速1．5ml／min。用離體培養(yǎng)的Hcla細胞株，培養(yǎng)液為含依次用蒸餾水，0．05N，0．1N，0．3N，有15％小牛血清的RPM一1640。按照下山0．5NNaCl溶液洗脫，每15ml為流分。-。等抗癌藥物的細晦殺作用碡暈方法稍加根

5、據(jù)各洗脫流分中碳水化合物的含量制成改進進行分組加藥【。生長狀態(tài)良好的洗脫曲線。凝膠柱層析在Sepharose4B柱Hela細胞經(jīng)消化液處理(0．25％胰蛋白上進行(L：40cm，；2．5cm)，樣品酶和0．02％EDTA按1：1比例混合)，制50mg溶于3ml蒸餾水中，上柱后，以蒸餾備成細胞懸液，。分離細胞率為95％以上水洗脫，恒定流速ld／8sec．，每7ml為一經(jīng)細胞計數(shù)后，將其稀釋到1×10。細胞流分，以酚硫酸法測定各流分中的吸收／m1培養(yǎng)液，取10ml培養(yǎng)瓶，每3瓶1組，度(A)繪制出洗脫曲線。每瓶加入lml細胞懸液，加藥組加入0．5ml3．分析鑒定含藥品培養(yǎng)液，每種藥品分成5個劑量

6、梯蛋白質、糖醛酸、總糖含量分別以度，組間劑量比為1：10，對照組加入不Lowry【盯、咔唑【們、酚一硫酸法’測含藥品的培養(yǎng)液，經(jīng)COz孵育箱培養(yǎng)7定，牛血清蛋白(BSA)，半乳糖醛酸和天，待集落長大到1mm左右，經(jīng)甲醇固葡萄糖為相應的標準品。紙層析以乙酸乙定，Giema染色，記錄各組集落數(shù)及每組酯：吡啶：乙酸：水(5：5：1：3)為展的均值和標準差，各組接種細胞數(shù)與形成開劑，在MN—C微晶纖維素膜上進行。的集落數(shù)之比為集落形成率(CEF)，按各樣品在121℃，2M的三氟乙酸中水解黔式s：求出存活率(S1．5小時后，揮盡三氟乙酸，加水點樣。氣相層析在SC-7氣相色譜儀上進行，及致死率(1ogl

7、／s)。l％OV一225為固定液多糖經(jīng)水解(2M三-電泳在醋酸纖維索薄膜上進行。樣氟乙酸，121℃，1．5，J、時)，還原(NaBH．，品配制成lmg／lmi水溶液，點樣fS,以R．T．)，。乙?；?醋l酐，121℃，3小硼砂緩沖液(0．05M~J]砂：O．1MNaOH時)，制成alditolacetates，、所含的酸2：’1)。250V電泳20分鐘，繼以甲笨胺性糖經(jīng)離子交換樹脂分離后，還原由它們蘭染色。