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1、紅細(xì)胞血型血清學(xué)試驗(yàn)安徽省合肥市第一人民醫(yī)院輸血科林正民江建鋒陳玲梁曉瀏IgG抗A（B）測(cè)定【原理】血清以巰基乙醇（2-mercaptoethanol,簡(jiǎn)稱2-me）處理后，IgM抗體分子裂解為6-7S亞單位。此種亞單位雖然仍保持與抗原結(jié)合的能力，但已失去與相應(yīng)紅細(xì)胞凝集的作用。IgG抗體分子則不被2-me滅活，保持與相應(yīng)紅細(xì)胞致敏的血清學(xué)特性。IgA抗體分子可部分被滅活（7S亞單體不受影響，9S及11S多聚體被滅活）?！驹噭?、0.2mol/L2-巰基乙醇應(yīng)用液取巰基乙醇1.6ml以pH7.4PBS（KH2PO41.73g,Na2HPO4·12H2O19
2、.35g,NaCl8g加蒸餾水至100ml）稀釋到100ml，分裝安瓿，每支1ml或2ml,冰箱保存?zhèn)溆谩?、受檢者血清。3、5%A型和B型紅細(xì)胞PBS（或生理鹽水）懸液。4、抗人球蛋白血清。【操作】1、吸取受檢者血清0.4ml，加2-me應(yīng)用液0.4ml，混合，將試管口塞緊，置37℃水浴中2h。2、排列小試管（10mm×60mm）兩排，每排10支，第一排每管各加pH7.4的PBS0.4ml。3、第1排第1管加2-me處理血清0.4ml，混合，吸出0.6ml，移0.2ml至第2排第1管內(nèi)，其余0.4ml移入第1排第2管內(nèi)，混合。以此類推，作倍量稀釋至第10管
3、，每管內(nèi)留有1:2,1:4,…1:1024不同稀釋度的血清各0.2ml。4、第1排每管各加5%A型紅細(xì)胞懸液0.2ml，第2排每管各加5%B型紅細(xì)胞懸液0.2ml，置37℃水浴溫育1h。5、結(jié)果觀察如在前幾管內(nèi)發(fā)現(xiàn)有紅細(xì)胞凝集者，是由于高效價(jià)IgG抗A(B)或IgA抗A(B)所引起，稱為“鹽水效價(jià)”。6、其余紅細(xì)胞未見凝集的試管，再以pH7.4PBS洗滌3次，除去洗滌液，留取壓實(shí)紅細(xì)胞。7、每管各加pH7.4的PBS2滴，混合。8、每管各取1滴，分別移至另一排小試管中，再各加最適稀釋度抗人球蛋白血清1滴，混合。9、1000r/min離心1min。10、輕輕搖
4、動(dòng)試管，觀察結(jié)果，紅細(xì)胞凝集的最高稀釋度的倒數(shù)即為IgG抗A或抗B效價(jià)?！靖阶ⅰ?、本法常用于ABO血型IgG抗A或抗B效價(jià)的測(cè)定，如ABO新生兒溶血病母親血清中IgG抗A(B)的測(cè)定。2、二硫蘇糖醇（dithiothreitol,DTT）也可用于滅活I(lǐng)gM抗體，以測(cè)定IgG抗體。方法：0.01mol/LDDT(0.77gDTT溶于500ml等滲鹽水)與等量受檢者血清混合，置37℃水浴30min，再以此處理血清進(jìn)行試驗(yàn)。DTT的優(yōu)點(diǎn)為無惡臭味，反應(yīng)快速，但對(duì)強(qiáng)抗體滅活效果較差?？骨虻鞍自囼?yàn)抗球蛋白試驗(yàn)（antiglobulintest,AGT）又稱Coomb
5、s試驗(yàn)，是檢查不完全抗體的一種很好的方法。將抗球蛋白血清（antiglobulinserum，AGS）加入已致敏的紅細(xì)胞鹽水懸液中，紅細(xì)胞表面的抗體球蛋白（使其致敏的不完全抗體）與抗球蛋白血清中的抗體發(fā)生特異性反應(yīng)，使紅細(xì)胞發(fā)生凝集。抗球蛋白血清除了可以測(cè)定紅細(xì)胞上的IgG抗體外，還可以測(cè)定IgM和IgA，也可以測(cè)補(bǔ)體組分（C3、C4）。所謂廣譜AGS即包括抗IgG和抗C3。（一）直接抗球蛋白試驗(yàn)【原理】利用抗球蛋白血清可與體內(nèi)已被不完全抗體或補(bǔ)體致敏紅細(xì)胞產(chǎn)生凝集反應(yīng)，用于檢查紅細(xì)胞是否已被不完全抗體所致敏，如新生兒溶血?。ㄌ杭t細(xì)胞被母親血型抗體致敏）溶
6、血性輸血反應(yīng)（輸入的不相合紅細(xì)胞被受血者不完全抗體致敏）自身免疫性溶血性貧血（患者紅細(xì)胞被自身抗體致敏）以及藥物誘導(dǎo)產(chǎn)生的自身抗體（由甲基多巴類藥物、青霉素等所致）?！驹噭?、抗球蛋白血清（廣譜及單價(jià)），市售合格產(chǎn)品。2、用不完全抗D致敏的5%Rh(D)陽性紅細(xì)胞鹽水懸液供陽性對(duì)照用。取3人O型紅細(xì)胞，混合，經(jīng)鹽水洗滌后取壓緊的紅細(xì)胞，加等量抗D血清，置37℃水浴致敏30min,取出后離心去除上清液，以生理鹽水洗滌3次，最后再用鹽水配成5%紅細(xì)胞懸液。3、正常人5%D陽性紅細(xì)胞懸液（未致敏），供陰性對(duì)照用，除不用抗D血清外，按上法配制。【操作】1、取受檢查
7、紅細(xì)胞，以生理鹽水洗滌3次，末次洗滌后，將上層鹽水倒盡，再以濾紙將管口附著的鹽水吸去，配成5%紅細(xì)胞鹽水懸液。2、取上述5%受檢者紅細(xì)胞鹽水懸液1滴，移入1小試管（10mm×60mm）內(nèi)，加抗球蛋白血清1滴，混勻。3、陽性對(duì)照：用不完全抗D血清致敏的5%D陽性紅細(xì)胞懸液1滴加抗球蛋白血清1滴，混勻。4、陰性對(duì)照：正常人5%D陽性紅細(xì)胞懸液1滴加抗球蛋白血清1滴，混勻。5、受檢者以及陽性、陰性對(duì)照管同時(shí)以1000r/min離心1min，輕輕側(cè)動(dòng)，觀察結(jié)果。6、結(jié)果判定如陽性對(duì)照管凝集，陰性對(duì)照管不凝集，則受檢者紅細(xì)胞凝集者為陽性，不凝集者為陰性?！靖阶ⅰ?、標(biāo)
8、本采集后立即進(jìn)行試驗(yàn)，延遲試驗(yàn)或中途停止可使抗體從細(xì)
