腎癌乙酰肝素酶基因和蛋白表達(dá)的研究.doc

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1、腎癌乙酰肝素酶基因和蛋白表達(dá)的研究作者：涂響安，丘少鵬，鄧春華，呂自力，胡斌，鄭克立【摘要】目的實(shí)驗(yàn)證明乙酰肝素酶在多種惡性腫瘤中有高表達(dá)，并可能在惡性腫瘤細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。本研究探討腎癌乙酰肝素酶基因和蛋白表達(dá)水平及其與腎癌發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的關(guān)系。方法應(yīng)用熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)和免疫組化Envision二步法分別檢測30例新鮮腎癌和癌旁正常組織中乙酰肝素酶mRNA的表達(dá)水平及62例石蠟包埋腎癌組織中乙酰肝素酶蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果乙酰肝素酶mRNA在腎癌中陽性表達(dá)11例(36.7%)，乙酰肝素酶蛋白在腎癌中陽性表達(dá)15例(24.2%)，其表達(dá)率與

2、腫瘤的病理分級(jí)、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有相關(guān)性(P<0.05)。結(jié)論乙酰肝素酶基因和蛋白的異常表達(dá)可作為腎癌發(fā)生和發(fā)展的預(yù)后參數(shù)。【關(guān)鍵詞】腎腫瘤；乙酰肝素酶；免疫組化；熒光定量PCRStudyofheparanasegeneandproteinexpressioninrenalcellcarcinomaABSTRACT:ObjectiveHeparanaseisoverexpressedinmanymalignanttumorcells,itmayplayapivotalroleininvasionandmetastasisofmalignanttumors

3、.Thestudyistodeterminetheexpressionofheparanasegeneandproteininrenalcellcarcinomaandtherelationshipwithitsdevelopment,progressionandmetastasis.MethodsFluorescencequantitativeRTPCRwasusedtodetecttheexpressionofheparanasemRNAin30casesoffreshrenalcellcarcinomaandadjacentnormaltissues.Im

4、munohistochemicaltechniquewasusedtodetecttheexpressionofheparanaseproteinin62casesofparaffinembeddedrenalcellcarcinomatissues.ResultsThepositiveexpressionsofheparanasemRNAandproteinwere36.7%(11/30)and24.2%(15/62),respectively.TheheperanasemRNAandproteinexpressionwerecorrelatedwiththe

5、pathologicaltype,clinicalstageandlymphnodemetastasis(P<0.05).ConclusionHeparanasegeneandproteinoverexpressionmightserveasamarkerfortheprognosisofrenalcellcarcinoma.KEYWORDS:kidneyneoplasms;heparanase;immunohistochemicaltechnique;fluorescencequantitativePCR細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜是腫瘤細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移的屏障。糖氨聚

6、糖是屏障的主要成分之一，主要成分為硫酸乙酰肝素蛋白多糖(heparansulfateproteoglycan,HSPG)。乙酰肝素酶(heparanase,4Hpa)正是一種裂解糖氨聚糖中HS鏈的內(nèi)切糖苷酶，在細(xì)胞侵襲中起著極其重要的作用。最近,隨著Hpa基因得以克隆，Hpa在侵襲性細(xì)胞穿越血管壁，實(shí)現(xiàn)浸潤、擴(kuò)散、轉(zhuǎn)移過程中的關(guān)鍵作用受到廣泛關(guān)注[1]。我們應(yīng)用熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)和免疫組化Envision二步法分別檢測30例新鮮腎癌和癌旁正常組織中乙酰肝素酶mRNA的表達(dá)水平及62例石蠟包埋腎癌組織中乙酰肝素酶蛋白的表達(dá)水平，探討腎癌乙酰肝素酶基因和蛋白

7、的表達(dá)水平及其與腎癌發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的關(guān)系。1資料與方法1.1臨床資料收集中山大學(xué)第一附屬醫(yī)院泌尿外科2001年11月-2003年12月手術(shù)切除腎癌石蠟包埋組織標(biāo)本62例，男性45例，女性17例。年齡31-78歲，平均54.1歲。Fuhrman分級(jí)：G118例，G230例，G314例。UICC臨床分期：T126例，T220例，T316例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性23例，陰性39例。10例正常腎臟組織為對(duì)照。另收集2002年1月-2003年12月手術(shù)切除新鮮腎癌標(biāo)本和癌旁正常組織30例，男性21例，女性9例。年齡42-67歲，平均54.7歲。Fuhrman分級(jí)：G19例，G2

8、14例，G