細胞培養(yǎng)技術在腫瘤學研究中的應用

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1、細胞培養(yǎng)技術在腫瘤學研究中的應用（姓名：張曉娟學號：2006252昆明醫(yī)學院附一院）[摘要]:細胞培養(yǎng)技術是生物醫(yī)學中的一項重要技術，在腫瘤學研究中有著廣泛的應用。癌細胞有一系列不同于正常細胞的特性，如分化程度減弱，細胞形態(tài)和功能異常，自主性生長，浸潤轉(zhuǎn)移性和免疫性異常，體外培養(yǎng)無接觸抑制和在軟瓊脂中形成集落的特性，癌細胞體外培養(yǎng)是研究癌變機理和癌細胞行為的極好方法，能為腫瘤病因?qū)W、遺傳學和藥理學等提供便利的條件。同時也是研究癌細胞的藥物敏感性和誘導分化發(fā)生惡性逆轉(zhuǎn)的最理想的對象。[關鍵詞]：細胞培養(yǎng)技術腫瘤細胞培養(yǎng)（cellculture）細胞培養(yǎng)的含義，即是

2、把來自機體的組織經(jīng)分散成為單個細胞，放在類似于體內(nèi)的體外環(huán)境中生存，使其不斷生長、繁殖或傳代，借以觀察細胞的生長、繁殖、衰老等生命現(xiàn)象。還可以利用細胞進行細胞工程與細胞癌變等重大問題的研究。細胞培養(yǎng)也是研究病毒與研制疫苗的基礎技術。因此細胞培養(yǎng)技術在遺傳學、免疫學、腫瘤學、病毒學、分子生物學等領域已得到廣泛的應用。一：細胞培養(yǎng)基本操作技術1材料7從理論上講，各種動物和人體內(nèi)的所有組織都可進行培養(yǎng)。實際上幼體組織尤其是胚胎組織比年老個體的組織容易培養(yǎng)；分化程度低的組織比分化程度高的容易生長；腫瘤組織比正常組織容易培養(yǎng)。在無特定要求時，取易培養(yǎng)的組織進行培養(yǎng)，成功率

3、高。取材之后，最好立即培養(yǎng)，如因故不能培養(yǎng)時，應把組織切成1立方厘米左右的小塊，置于培養(yǎng)液中，4℃貯存；存放時間不宜超過24小時，放置時間過長或組織塊太大，細胞仍易壞死。從體內(nèi)取材時，應嚴格保持無菌，防止受到任何污染，也要避免受到紫外線照射或接觸任何化學試劑及有害藥物如碘、汞等。取腫瘤和其它病理組織時容易帶菌，為減少污染，可用含500~1000單位／毫升的青、鏈霉素BSS液，漂洗5~10分鐘后再做培養(yǎng)處理。2組織的分離從體內(nèi)取出的各種組織均由眾多細胞和纖維成分組成，而且結(jié)合十分緊密。一般體積大于1mm3的組織塊置于培養(yǎng)瓶中后，處于周邊的少量細胞即可能生存和生增殖

4、，但大部分中心的細胞可因營養(yǎng)穿透有限而代謝良，且受纖維成分束縛而難以移出。為獲取多量生長良好的細胞，必須把組織細胞分散開，使細胞解離出來；能達到單細胞水平更好，同時并不使細胞受傷害，細胞能很好生長。分散組織的方法有機械法和化學法兩種；根據(jù)組織種類和培養(yǎng)要求，宜采用相應的手段。3細胞計數(shù)法細胞懸液制備后，需要計算懸液中所含細胞數(shù)量；一般以細胞數(shù)/7毫升表示。因只有健康的細胞才有活力，接種后能夠生長增殖，所以在接種前應先檢查一下細胞的活力。4細胞凍存細胞一般凍存在液氮中，溫度達-196℃，貯存時間幾乎是無限的。用時解凍細胞仍能生長增殖，為培養(yǎng)工作提供了極大的方便。當

5、前已有適用于凍存大量細胞用的自動化凍存裝置，但非所有實驗室擁有此種設備，一般實驗室仍常用35立升液氮罐貯存法。5細胞運送當前培養(yǎng)細胞既可在國內(nèi)相互寄贈，也可進行國際間的交流，為此要有運輸細胞的方法。裝運方法有兩種，一是用液氮或干冰保存，效果較好，但需用特制容器如小液氮罐等，又因液氮和干冰蒸發(fā)均較快，適于空運，比較麻煩；另為充液法，比較簡便。二：細胞培養(yǎng)技術在腫瘤研究中的應用1腫瘤病因和發(fā)病機制的研究癌細胞在體內(nèi)惡性變時，易于形成腫瘤，但到體外培養(yǎng)時往往又難以培養(yǎng)成功，這不僅僅是因成纖維細胞的抑制作用，更重要的是體外缺乏有利于生長的微環(huán)境，由此可見環(huán)境對癌發(fā)生和發(fā)

6、展是有很大作用的。在腫瘤細胞的動物致癌實驗時，所選擇的動物都是經(jīng)理化因素處理后造成骨髓和免疫抑制的動物或細胞免疫功能缺陷的無胸腺裸鼠，這也可以證明腫瘤細胞在這種動物體內(nèi)易于形成腫瘤，也是與動物體內(nèi)的微環(huán)境有關。7體外正常細胞的轉(zhuǎn)化試驗中更進一步證明了物理因素（如射線）化學因素（化學致癌劑）及生物因素（致癌病毒、EB病毒、SV40和多發(fā)瘤病毒等），均能使正常細胞發(fā)生轉(zhuǎn)化，致使正常細胞永生化或惡性化，為癌的誘發(fā)因素和環(huán)境提供了實驗依據(jù)，環(huán)境因素或藥物的致畸，致突變研究也可為該環(huán)境條件或藥物的致癌性提供實驗依據(jù)，因此細胞培養(yǎng)是癌的發(fā)生和發(fā)展研究的理想實驗研究手段。2抗

7、癌藥物篩選方面的研究不同的癌細胞對不同的化療藥物具有不同的敏感性，因此采用癌細胞體外培養(yǎng)方法，既可研究某種藥物對不同癌細胞的敏感性，為藥物抗癌敏感譜提供依據(jù)，同時又可采用某種癌細胞開展對不同藥物，不同劑量的敏感性研究，以篩選出對該腫瘤最敏感的化療藥物和使用劑量，供人體治療時參考。3癌基因和抑癌基因方面的研究細胞的惡性變不僅與癌基因（原癌基因）的活化有關，而且與抑癌基因功能受阻也有關。人體細胞中既存在有癌基因（原癌基因），又有抑癌基因的存在，實驗證明癌的發(fā)生和發(fā)展與這兩種基因的表達調(diào)控密切相關。這些基因在細胞內(nèi)表達水平，我們可以采用RNA探針或特異蛋白測定來進行研

8、究，由此可見體外細胞培養(yǎng)