微量移液器的校準(zhǔn)方法

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1、微量移液器的校準(zhǔn)方法定量移液器的校準(zhǔn)——稱量法　　校準(zhǔn)應(yīng)在無通風(fēng)的房間，移液器和空氣溫度在20℃-25℃之間，相對濕度必需在55％以上。特別是當(dāng)移液量在50ul以下其空氣濕度應(yīng)越高越好以減少蒸發(fā)損失的影響?！　≡谌f分之一級別天平上放置一個小三角燒瓶，用待標(biāo)定的移液器吸取蒸餾水（隔夜存放）加入小三角燒瓶內(nèi)底部，每次稱重后計量，去皮重后再加蒸餾水，連續(xù)加蒸餾水10次。加蒸餾水的量根據(jù)待標(biāo)定的移液器不同規(guī)格而不同，見下表。移液器10次標(biāo)定稱量在所要求的重量范圍之內(nèi)為合格移液器；不合格移液器需要進行調(diào)整。移液器標(biāo)定合格后，填寫自校記

2、錄。移液器規(guī)格標(biāo)定使用蒸餾水量要求重量范圍0.5-10ul2ul1.75-2.25mg5-40ul10ul9.8-10.2mg40-200ul70ul69.4-70.6mg200-1000ul300ul298.0-302.0mg1-5ml2000ul1990.0-2010.0mg2-10ml3500ul3485.0-3515.0mg一、實驗室簡單檢測（一）氣密性檢測移液器吸滿液體后，手持垂直放置15s，檢查吸嘴的尖頭有無液滴，如有，則說明漏氣。（二）準(zhǔn)確性檢測1)量程小于1μl，建議使用分光光度法檢測。將移液器調(diào)至目標(biāo)體積，

3、然后移取染料溶液，加入一定體積的蒸餾水中，測定溶液的稀釋度（334nm或340nm），重復(fù)幾次移液操作，計算移液器的精確度。2)量程大于1μl，可以用稱重法檢測。通過對水的稱重，轉(zhuǎn)換成體積（體積=質(zhì)量/密度），鑒別移液器的準(zhǔn)確性。由于水的密度是隨著溫度變化而變化，且稱量天平本身精確度不符合檢測要求，檢測又大多在一個開放式空間內(nèi)操作，偏差在所難免。因而，此種稱量法只能現(xiàn)場粗略地判斷移液器的準(zhǔn)確性，進一步的校準(zhǔn)必須在專業(yè)的實驗室操作進行。注意：稱重法實驗室必備條件是高度靈敏的分析天平（定期校準(zhǔn)）、雙蒸水和稱量容器。水、移液器和吸

4、嘴必須具有相同的溫度（20℃時水的密度為0.09982）。二、專業(yè)校準(zhǔn)移液器的工作量大，長期使用，將會使彈簧彈力發(fā)生變形，加之本身是塑料，不耐磨擦，就會產(chǎn)生誤差。為了保證移液器傳遞液體量的準(zhǔn)確性，必須對移液器進行定期校準(zhǔn)。為了更好地發(fā)揮該類計量儀器的作用，對新購進的儀器要進行校準(zhǔn)才能使用；對正在使用的計量儀器，由于長期使用會造成其示值于度量對象的誤差，這種誤差若不進行控制，及時校正，必定會影響科研工作。因此，對使用的移液器要定期檢定、校正，并建立檔案，只有這樣才能使其在日常工作中更好的發(fā)揮作用。目前，在許多實驗室條件下進行的

5、常規(guī)檢測并不能完全取代專業(yè)的校準(zhǔn)工作，因為校準(zhǔn)對于外部環(huán)境、工作條件及使用的精密儀器具有較高的技術(shù)要求，而這些條件往往是大多數(shù)實驗室無法提供的?，F(xiàn)在一些大型的移液器制造商均采用全球統(tǒng)一的移液器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范，利用專業(yè)軟件校正系統(tǒng)，通過計算機對分析天平進行在線控制，測量、數(shù)據(jù)采集、計算、結(jié)果評價等環(huán)節(jié)由軟件控制完成，所有人為操作都被計算機記錄隨報告打印出來，采用電腦對數(shù)據(jù)進行評估認(rèn)證，完全排除了人為操縱校準(zhǔn)結(jié)果的可能性，并制定當(dāng)?shù)卮砩烫峁I(yè)的校準(zhǔn)和維修服務(wù)。下面以eppendorf移液器公司為例，介紹其專業(yè)校準(zhǔn)操作。（一）校

6、準(zhǔn)的基本操作條件操作室：獨立房間，顯示溫度和濕度狀態(tài)。溫度控制：15~30℃（±0.5℃）濕度控制：60%~90%工作臺面：防震、防塵、遠離熱源、無陽光直射。天平：0.00001g精密分析天平（小數(shù)點后5位），每年需由廠家進行校準(zhǔn)。防蒸發(fā)裝置：Eppendorf提供的濕度阱，防止稱量液體的揮發(fā)。測試介質(zhì)：雙蒸水，每4h更換一次，批次更換周期不大于2周。（二）操作過程1）同溫化處理：校正前，所有移液器及校正介質(zhì)（如工作臺、天平、雙蒸水等）置于相同操作間至少4h，以確保它們具有相同的溫度。2）內(nèi)外部清洗。3）潤滑活塞。4）校準(zhǔn)：

7、采用三點校準(zhǔn)法，即根據(jù)移液器量程范圍，選取最低量程、中間值和最高量程三點分別測試10次，各個測試點取其平均值，計算其準(zhǔn)確度（inaccuracy）和精確度（imprecision），評價標(biāo)準(zhǔn)符合DIN12650要求。5）校準(zhǔn)報告：可根據(jù)客戶需求提供給算計打印的標(biāo)準(zhǔn)報告或PICASO校正報告，符合ISO、DIN或ASTM相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。三、影響準(zhǔn)確性的因素1）操作錯誤：包括30℃手持式移液器吸液；與吸嘴不匹配，較易造成脫落；殘留的試劑倒流，污染活塞和密封圈；快速吸液排液，導(dǎo)致部分液體殘留在吸頭上等都會影響準(zhǔn)確性。2）移液器損壞：包括

8、移液器的頭部被刮擦，斷裂受損；活塞受污染；彈簧受腐蝕等。3）操作條件的影響：包括未作調(diào)整吸取與水不同密度的液體；樣品和移液器的差別太大等