飼料防霉劑防霉效果判定的三種便捷的方法

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1、7飼料防霉劑防霉效果判定的三種便捷的方法韓康印，歐陽(yáng)亮，黃海珊韓康印，上海邦成生物科技有限公司，201615，上海市嘉蓬路177號(hào)。歐陽(yáng)亮，黃海珊?jiǎn)挝患巴ㄓ嵉刂吠谝蛔髡哒罕疚慕榻B了平皿抑菌計(jì)數(shù)法、最低抑菌濃度法、杯碟法三種檢測(cè)防霉劑防霉效果的方法，并選擇丙酸鈣和雙丙酸銨作為實(shí)驗(yàn)材料，通過(guò)將其添加到培養(yǎng)基中來(lái)抑制米曲霉的生長(zhǎng)。通過(guò)最低抑菌濃度法的實(shí)驗(yàn)，我們測(cè)定了丙酸鈣和雙丙酸銨對(duì)米曲霉的最低抑菌濃度，此外，通過(guò)將最低抑菌濃度法與平皿抑菌計(jì)數(shù)法、杯碟法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相比較，結(jié)果我們發(fā)現(xiàn)這三種方法在測(cè)

2、定丙酸鈣和雙丙酸銨對(duì)米曲霉的抑制效果上，結(jié)果是一致的。本文中介紹的三種方法，實(shí)驗(yàn)周期短，可用于防霉劑樣品的初步篩選。關(guān)鍵詞：防霉劑防霉效果最低抑菌濃度引言中國(guó)是農(nóng)業(yè)大國(guó)，也是人口大國(guó)，隨著養(yǎng)殖行業(yè)的規(guī)?；暳系纳a(chǎn)也呈現(xiàn)規(guī)?；秋暳显谏a(chǎn)、存儲(chǔ)、運(yùn)輸過(guò)程中常常被霉菌感染，霉菌主要通過(guò)分解飼料中的蛋白質(zhì)、糖類和脂肪等造成飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和適口性的下降[3]，對(duì)養(yǎng)殖的家禽健康照成嚴(yán)重的危害。據(jù)估計(jì)，全世界每年有25%的糧食和飼料被霉菌污染，造成巨大的損失。如何預(yù)防和減少霉變，目前防霉的方法有物理防霉

3、法和化學(xué)防霉法，根據(jù)目前飼料生產(chǎn)的成本控制、包裝、儲(chǔ)存等實(shí)際情況，添加化學(xué)防霉劑是一種較經(jīng)濟(jì)、實(shí)用、有效的辦法。由于飼料防霉劑關(guān)系到飼料生產(chǎn)和安全使用，也會(huì)影響到食品安全，選擇合適的防霉劑意義重大。由于目前市面上的防霉劑種類繁多，價(jià)格差異較大。如有機(jī)酸中乙酸、丙酸、苯甲酸等；有機(jī)酸鹽類中有丙酸鈣、苯甲酸鈉等，還有富馬酸二甲酯、丙酸和其他有酸復(fù)配及丙酸和丙酸鈣復(fù)配產(chǎn)品類[2]。據(jù)調(diào)查，部分飼料廠為了提高產(chǎn)品水分選擇防霉劑品種中價(jià)格最高的或者進(jìn)口品牌，而部分廠家則會(huì)選擇價(jià)格低廉的以節(jié)約成本，這在一定程

4、度上反映了各飼料廠在選擇防霉劑上的盲目性[1]。目前用于飼料防霉劑防霉效果的檢測(cè)方法較多，主要有平皿抑菌計(jì)數(shù)法、杯碟法、最低抑菌濃度法、二氧化碳釋放法、溫度測(cè)定法、飼料常規(guī)試驗(yàn)、飼料破壞試驗(yàn)[6]等，本文選擇平皿抑菌計(jì)數(shù)法、最低抑菌濃度法、杯碟法3種方法對(duì)市場(chǎng)上常用的多種防霉劑進(jìn)行檢測(cè)并加以比較，旨在為飼料廠篩選防霉劑樣品時(shí)提供參考。1實(shí)驗(yàn)材料與方法71.1實(shí)驗(yàn)材料防霉劑原料樣品：丙酸鈣和雙丙酸銨；實(shí)驗(yàn)菌種：供試菌種來(lái)源于發(fā)霉飼料中分離純化的米曲霉。霉菌孢子液的制備[5]：將斜面保存的米曲霉接種到

5、PDA固體培養(yǎng)基的斜面上，30℃培養(yǎng)3天。在無(wú)菌條件下用10ml無(wú)菌水將PDA斜面培養(yǎng)基上的霉菌孢子洗脫，制成霉菌孢子懸液。PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂15—20g，水1000ml，pH自然，馬鈴薯去皮，切成塊煮沸30min，然后用紗布過(guò)濾，再加糖及瓊脂，溶化后補(bǔ)足水至1000ml，121℃滅菌30min。查氏培養(yǎng)基：NaNO32g，K2HPO41g，KCl0.5g，MgSO40.5g，F(xiàn)eSO40.01g，蔗糖30g，瓊脂15—20g，水1000ml，pH自然，121℃滅菌2

6、0min。1.2實(shí)驗(yàn)器材全溫振蕩培養(yǎng)箱：型號(hào)HZP-250，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司生化培養(yǎng)箱：型號(hào)SHP-300，上海三發(fā)科學(xué)儀器有限公司立式壓力蒸汽滅菌器：型號(hào)YXQ-LS-500II，上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠電子天平：型號(hào)JA1003，上海瞬宇恒平科學(xué)儀器有限公司移液槍：100—1000ul培養(yǎng)皿牛津杯：不銹鋼管，外徑（7.8±0.1mm），內(nèi)徑（6.0±0.1mm），高度（10±0.1mm）抑菌圈自動(dòng)測(cè)量分析儀或游標(biāo)卡尺（精確到0.1mm）1.3實(shí)驗(yàn)方法1.3.1平皿抑菌計(jì)數(shù)法[4]

7、本法根據(jù)霉菌生理特性和防霉劑防霉原理，選擇適宜霉菌生長(zhǎng)而不適宜細(xì)菌生長(zhǎng)的高鹽查氏培養(yǎng)基，滅菌后趁熱傾注20ml培養(yǎng)基至培養(yǎng)皿內(nèi)，待培養(yǎng)基凝固后。將菌液稀釋至每毫升含霉菌約100個(gè)，將稀釋后的霉菌菌液與0.08g/ml的防霉劑樣品液按1:1混合后，取1ml混合液至固體培養(yǎng)基中間，均勻涂布，使防霉劑相對(duì)于培養(yǎng)基的濃度為0.2%，待干后，將培養(yǎng)皿翻轉(zhuǎn)，置于霉菌培養(yǎng)箱內(nèi)，在28℃下培養(yǎng)觀察霉菌菌落總數(shù)。以同體積的無(wú)菌水代替防霉劑樣品液與霉菌菌液混合的混合液作為空白對(duì)照。每組設(shè)置三個(gè)平行，28℃培養(yǎng)兩天。分

8、別以0.10g/ml、0.12g/ml的防霉劑樣品代替0.08g/7ml防霉劑樣品做重復(fù)實(shí)驗(yàn)，使防霉劑相對(duì)于培養(yǎng)基的濃度為0.25%、0.3%。表一固體培養(yǎng)基中防霉劑樣品添加量樣品0.08g/ml丙酸鈣0.08g/ml雙丙酸銨0.1g/ml丙酸鈣0.1g/ml雙丙酸銨0.1g/ml丙酸鈣0.12g/ml雙丙酸銨丙酸鈣0.2%1ml00000雙丙酸銨0.2%01ml0000丙酸鈣0.25%001ml000雙丙酸銨0.25%0001ml00丙酸鈣0.3%00001ml0雙丙酸銨0.3%