鎘對(duì)長江化溪蟹心臟組織器官的毒性作用及機(jī)制研究

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6、WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame【摘要】：本學(xué)位論文綜合采用光鏡、電鏡、酶學(xué)檢測、流式細(xì)胞術(shù)、基因克隆、實(shí)時(shí)熒光定量PCR等手段與方法,以長江華溪蟹(Sinopotamonyangtsekiense)作為研究對(duì)象,采用急性毒性實(shí)驗(yàn)方法,研究了不同濃度鎘暴露對(duì)心臟組織器官的影響,旨在闡明鎘對(duì)心臟的毒性效應(yīng)和致毒機(jī)制。為了研究鎘對(duì)心臟組織器官的細(xì)胞與生化毒理學(xué)效應(yīng),就心

7、肌細(xì)胞顯微與亞顯微結(jié)構(gòu)進(jìn)行了觀察,并且檢測了鎘的蓄積、超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(GPx)三種抗氧化酶的活力和脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)的含量,探討了心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)改變和氧化應(yīng)激之間的關(guān)系。在此基礎(chǔ)上,為了求證鎘對(duì)心臟造成氧化損傷后是否進(jìn)一步誘導(dǎo)心肌細(xì)胞發(fā)生凋亡,分別采用Hoechst33258熒光染色法、瓊脂糖凝膠電泳法、AnnexinV-FITC/PI流式細(xì)胞技術(shù)和Caspase-3酶活力測定的方法,檢測了鎘對(duì)心肌細(xì)胞凋亡的影響。之后,為了探明心臟對(duì)鎘

8、的應(yīng)答反應(yīng),采用RT-PCR技術(shù)克隆得到了長江華溪蟹一種熱休克蛋白70(SyHSP70)基因的部分cDNA序列,并利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測了鎘誘導(dǎo)SyHSP70和MTmRNA表達(dá)的變化特征。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下：1、鎘對(duì)長江華溪蟹主要組織器官細(xì)胞的影響采用石蠟切片和H.E.染色方法,研究了7.25、14.50、29.00、58.00、116.00mg·L-1鎘暴露4d后,對(duì)長江華溪蟹肝胰腺、鰓、心臟和精巢四種主要組織器官組織細(xì)胞的影響,旨在為后續(xù)研究工作奠定基礎(chǔ),為鎘對(duì)溪蟹