生化鑒定原理

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1、致病菌檢測(cè)生化鑒定原理及應(yīng)用三糖鐵瓊脂試驗(yàn)靛基質(zhì)試驗(yàn)ONPG試驗(yàn)甲基紅MR試驗(yàn)VP試驗(yàn)?zāi)蛩孛冈囼?yàn)賴氨酸脫羥酶試驗(yàn)淀粉水解酶試驗(yàn)?zāi)懼呷~苷水解試驗(yàn)糖（醇、苷）類發(fā)酵試驗(yàn)甘油復(fù)紅試驗(yàn)葡萄糖酸氧化試驗(yàn)氧化發(fā)酵試驗(yàn)枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)呼吸酶類試驗(yàn)硝酸鹽還原試驗(yàn)三糖鐵瓊脂試驗(yàn)本培養(yǎng)基適合于腸桿菌科的鑒定。用于觀察細(xì)菌對(duì)糖的利用和硫化氫（變黑）的產(chǎn)生。該培養(yǎng)基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例為10:10:1，只能利用葡萄糖的細(xì)菌，葡萄糖被分解產(chǎn)酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸，因接觸空氣而氧化，加之細(xì)菌利用培養(yǎng)基中含氮物質(zhì)，生成堿性產(chǎn)物，故使斜面后來又變紅，底部由于是在厭氧狀態(tài)下

2、，酸類不被氧化，所以仍保持黃色。而發(fā)酵乳糖的細(xì)菌(e.coli)，則產(chǎn)生大量的酸，使整個(gè)培養(yǎng)基呈現(xiàn)黃色。如培養(yǎng)基接種后產(chǎn)生黑色沉淀，是因?yàn)槟承┘?xì)菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氫，硫化氫和培養(yǎng)基中的鐵鹽反應(yīng)，生成黑色的硫化亞鐵沉淀。三糖鐵瓊脂試驗(yàn)志賀氏菌都能分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，大多不發(fā)酵乳糖，不產(chǎn)生H2S。大腸桿菌，能分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，大多數(shù)能分解乳糖，不產(chǎn)生H2S。沙門氏菌，能分解葡萄糖，不發(fā)酵乳糖，大多數(shù)產(chǎn)生H2S，多數(shù)產(chǎn)氣。靛基質(zhì)試驗(yàn)?zāi)承┘?xì)菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨水中的色氨酸生成吲哚（靛基質(zhì)），當(dāng)加入吲哚試劑（對(duì)位二甲氨基苯甲醛）后則形成紅色的玫瑰吲哚

3、。β－半乳糖苷酶試驗(yàn)（ONPG試驗(yàn)）原理：乳糖發(fā)酵過程中需要乳糖通透酶和β－半乳糖苷酶才能快速分解。有些細(xì)菌只有半乳糖苷酶，因而只能遲緩發(fā)酵乳糖，所有乳糖快速發(fā)酵和遲緩發(fā)酵的細(xì)菌均可快速水解鄰硝基酚-β-D-半乳糖苷（O-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside,ONPG）而生成黃色的鄰硝基酚。用于枸櫞酸菌屬、亞利桑那菌屬與沙門菌屬的鑒別。應(yīng)用：可用于遲緩發(fā)酵乳糖細(xì)菌的快速鑒定，本法對(duì)于迅速及遲緩分解乳糖的細(xì)菌均可短時(shí)間內(nèi)呈現(xiàn)陽性。埃希菌屬、枸櫞酸桿菌屬、克雷伯菌屬、哈夫尼亞菌屬、沙雷菌屬和腸桿菌屬等均為試驗(yàn)陽性，而沙門菌屬、變形桿菌屬和普羅

4、威登斯菌屬等為陰性。甲基紅（MR）試驗(yàn)原理：某些細(xì)菌在糖代謝過程中，分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸進(jìn)一步被分解為甲酸、乙酸和琥珀酸等，使培養(yǎng)基pH下降至4.5以下時(shí)，加入甲基紅指示劑呈紅色。如細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)酸量少，或產(chǎn)生的酸進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為其它物質(zhì)（如醇、醛、酮、氣體和水），培養(yǎng)基pH在5.4以上，加入甲基紅指示劑呈桔黃色。應(yīng)用：常用于腸桿菌科內(nèi)某些種屬的鑒別，如大腸埃希菌和產(chǎn)氣腸桿菌，前者為陽性，后者為陰性。腸桿菌屬和哈夫尼亞菌屬為陰性，而沙門菌屬、志賀菌屬、枸櫞酸桿菌屬和變形桿菌屬等為陽性。VP試驗(yàn)原理：測(cè)定細(xì)菌產(chǎn)生乙酰甲基甲醇的能力。某些細(xì)菌如產(chǎn)氣腸桿菌，分解葡萄糖

5、產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸進(jìn)一步脫羧形成乙酰甲基甲醇。在堿性條件下，乙酰甲基甲醇被氧化成二乙酰，進(jìn)而與培養(yǎng)基中的精氨酸等含胍基的物質(zhì)結(jié)合形成紅色化合物。即V-P試驗(yàn)陽性。應(yīng)用：主要用于大腸埃希菌和產(chǎn)氣腸桿菌的鑒別。本試驗(yàn)常與MR試驗(yàn)一起使用，一般情況下，前者為陽性的細(xì)菌，后者常為陰性，反之亦然。但腸桿菌科細(xì)菌不一定都這樣規(guī)律，如蜂房哈夫尼亞菌和奇異變形桿菌的VP試驗(yàn)和MR試驗(yàn)常同為陽性。尿素酶試驗(yàn)原理：某些細(xì)菌具有尿素酶，在含有尿素的培養(yǎng)基中，分解尿素產(chǎn)生氨，使培養(yǎng)基呈堿性，此時(shí)培養(yǎng)基中的酚紅指示劑顯紅色。賴氨酸脫羥試驗(yàn)賴氨酸脫酸主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定，也可用于某些非發(fā)酵

6、菌。試驗(yàn)關(guān)培養(yǎng)基中含有賴氨酸和葡萄糖，酸堿指示劑為溴甲酚紫（中性和堿性時(shí)紫色，酸性黃色），未用時(shí)為紫色。如果待測(cè)細(xì)菌將賴氨酸脫羧，則產(chǎn)生胺，為堿性，溴甲酚紫保持紫色，如果不脫羧，腸桿菌科的細(xì)菌都能分解葡萄糖，產(chǎn)酸，溴甲酚紫變?yōu)辄S色。氨基酸脫羧的對(duì)照管其實(shí)就是一個(gè)葡萄糖發(fā)酵管，不含氨基酸。由于實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性的為保持紫色不變，陰性結(jié)果為黃色，為保證結(jié)果的可靠性，須同時(shí)接種對(duì)照管，如對(duì)照管變?yōu)辄S色，說明細(xì)菌接種成功，證實(shí)試驗(yàn)管紫色（不變色）卻為陽性，而非未接種好細(xì)菌。此外，由于氨基酸脫羧的產(chǎn)物為尸胺、腐胺等，遇氧不穩(wěn)定，故各管接種完細(xì)菌后，需加入幾滴液體石蠟隔絕空氣，保持

7、胺的穩(wěn)定性。淀粉水解試驗(yàn)原理：產(chǎn)生淀粉酶的細(xì)菌能將淀粉水解為糖類，在培養(yǎng)基上滴加碘液時(shí)，可在菌落周圍出現(xiàn)透明區(qū)。應(yīng)用：用于白喉棒狀桿菌生物型的分型，重型淀粉水解試驗(yàn)陽性，輕、中型陰性；芽胞桿菌屬菌種和厭氧菌某些種的鑒定。膽汁七葉苷水解試驗(yàn)原理：在10%~40％膽汁存在下，測(cè)定細(xì)菌水解七葉苷的能力。七葉苷被細(xì)菌分解生成的七葉素，七葉素與培養(yǎng)基中的枸櫞酸鐵的二價(jià)鐵離子發(fā)生反應(yīng)形成黑色化合物。應(yīng)用：主要用于鑒別D群鏈球菌與其它鏈球菌的區(qū)別，以及腸桿菌科的某些種、某些厭氧菌（如脆弱擬桿菌等）的初步鑒別。D群鏈球菌本試驗(yàn)為陽性。糖（醇、苷）類發(fā)酵試驗(yàn)原理：不同