1細(xì)胞系生命期

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1、細(xì)胞系的生命期原代培養(yǎng)Primaryculture原代培養(yǎng)Primaryculture概念從體內(nèi)取出組織細(xì)胞開始培養(yǎng)到第一次進(jìn)行傳代之前的時(shí)期一個(gè)特征性的必然的生長(zhǎng)階段。完成了從體內(nèi)環(huán)境到體外環(huán)境的過渡和適應(yīng)過程，恢復(fù)了分裂增殖與生長(zhǎng)發(fā)育的能力含義:包含)①原代培養(yǎng)實(shí)質(zhì)是初次培養(yǎng)，即培養(yǎng)物接種到培養(yǎng)器皿中就不再分割，任其生長(zhǎng)繁殖②原代培養(yǎng)中的“代”并不是指細(xì)胞繁殖的“代”數(shù)③原代培養(yǎng)過程中不分割培養(yǎng)物不等于不更換培養(yǎng)液建立方法:組織塊法,分散(細(xì)胞懸液）法時(shí)間:一般~4周(代：細(xì)胞自接種至新培養(yǎng)皿中至其下一

2、次再接種傳代的時(shí)間為細(xì)胞的一代)特點(diǎn)(1)性質(zhì)①性狀似體內(nèi)可表達(dá)某些形態(tài)、結(jié)構(gòu)、功能,更能代表活體細(xì)胞最接近在體時(shí)的情況②細(xì)胞異質(zhì)性細(xì)胞成分混雜，除目的細(xì)胞之外，其它各種細(xì)胞還存在③細(xì)胞活躍移動(dòng)，分裂不旺盛④相互依賴性強(qiáng)獨(dú)立生存能力差,不易單個(gè)培養(yǎng)特點(diǎn)(2)發(fā)展過程:調(diào)整組成原代培養(yǎng)的產(chǎn)生--選擇結(jié)果:形成相對(duì)均一的細(xì)胞系選擇第一步:形成原代培養(yǎng)的基礎(chǔ)組織塊:能遷移出的消化分散:操作中能生存、附著能懸浮生存特點(diǎn)-發(fā)展過程選擇第二步:時(shí)間：數(shù)小時(shí)后至鋪滿(匯合confluence)變化：數(shù)小時(shí)后至進(jìn)一步選擇中3

3、種情況:能增殖能存活不能存活細(xì)胞類型,繼續(xù)改變,至鋪滿(鋪滿:貼附生長(zhǎng)的細(xì)胞在培養(yǎng)器皿中生長(zhǎng)達(dá)到一定數(shù)量彼此連接成單層長(zhǎng)滿器皿底壁)特點(diǎn)-發(fā)展過程選擇第三步:時(shí)間：鋪滿(匯合confluence)后(可用于生長(zhǎng)區(qū)域已被利用)變化：通過密度抑制密度抑制敏感的細(xì)胞(如正常細(xì)胞)密度抑制敏感低的細(xì)胞(如永生性細(xì)胞)特點(diǎn)-發(fā)展過程需及時(shí)傳代傳不傳代及何時(shí)傳代根據(jù)：接種的細(xì)胞數(shù)量培養(yǎng)瓶皿的大小培養(yǎng)條件在一定程度上具有可人為操作的特征傳代期--細(xì)胞系Subculture--Cellline傳代期--細(xì)胞系Ce

4、llline概述將原代培養(yǎng)物經(jīng)過分割，重新接種到兩個(gè)或兩個(gè)以上的器皿內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，進(jìn)入傳代培養(yǎng)期整個(gè)培養(yǎng)過程的主要時(shí)期原代培養(yǎng)物----要經(jīng)過反復(fù)傳代傳代培養(yǎng)期并不單指原代培養(yǎng)物經(jīng)首次傳代后的“第一代”培養(yǎng)過程而是指由首次傳代開始經(jīng)反復(fù)傳代一直到培養(yǎng)物開始衰退之前的全部時(shí)間傳代：細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖一段時(shí)間，到達(dá)一定細(xì)胞密度后，就應(yīng)將細(xì)胞分離成二或幾部份至新的培養(yǎng)器皿并更新補(bǔ)充培養(yǎng)液，使之繼續(xù)繁殖生長(zhǎng)，即傳代。經(jīng)過傳代即稱為細(xì)胞系細(xì)胞系可以繼續(xù)傳代傳代培養(yǎng)期就是維持細(xì)胞系增殖、生長(zhǎng)的培養(yǎng)過程傳代培養(yǎng)期的長(zhǎng)短：

5、培養(yǎng)的細(xì)胞種類供體年齡大小一般是有限細(xì)胞系特點(diǎn)細(xì)胞分裂增殖活動(dòng)旺盛，細(xì)胞生長(zhǎng)活躍細(xì)胞群體在調(diào)整：每次傳代,調(diào)整-因增殖能力、耐受力差異增殖能力較強(qiáng)的細(xì)胞漸處于優(yōu)勢(shì)其它逐漸淘汰傳代培養(yǎng)早期，細(xì)胞尚能保持二倍體核型隨著傳代次數(shù)增加細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化的概率增大能維持的代數(shù)一般是有限細(xì)胞系種族(主要):成纖維細(xì)胞人,50;猴,40;雞,37;鼠,8部位:人:胚肺50±10;腎8~19猴:肺5;腎20;耳40條件:如表皮細(xì)胞+EGF從50代增加至150年齡傳代的頻率原則上貼壁生長(zhǎng)將長(zhǎng)滿培養(yǎng)罪皿的生長(zhǎng)面(器皿的底壁)懸浮培養(yǎng)

6、下細(xì)胞密度足夠大具體時(shí)間并沒有定時(shí)，根據(jù)具體情況，但提前或過晚(尤以后者)都不合適一般:數(shù)天~一周因素:接種細(xì)胞數(shù)量:量大-快接種細(xì)胞性質(zhì):細(xì)胞系比原代-快培養(yǎng)液:高血清-快意義生物學(xué)意義:形成較均一的細(xì)胞實(shí)際意義:優(yōu)點(diǎn):可傳代,有特征,數(shù)目多,均一性,可凍存缺點(diǎn):遺傳學(xué)可改變,失去分化衰退期Senescencephase衰退期Senescencephase概述仍生存,但基本不增殖-衰退,死亡傳代培養(yǎng)到一定的代數(shù)時(shí)，細(xì)胞的生命活動(dòng)明顯減弱。細(xì)胞雖然生存，但生長(zhǎng)緩慢、很少分裂增殖甚或不再分裂，即使及時(shí)換液也無(wú)效

7、表明培養(yǎng)物已經(jīng)進(jìn)入衰退期，再向前發(fā)展，只有退化、死亡特點(diǎn):細(xì)胞系的生命期--歸宿有限細(xì)胞系:一般衰退、死亡轉(zhuǎn)化:永生化:--連續(xù)細(xì)胞系自發(fā)性轉(zhuǎn)化誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化永生化端粒端粒在真核細(xì)胞染色體兩端功能：保護(hù)染色體的穩(wěn)定性和完整性以維持DNA完整復(fù)制生理情況下---細(xì)胞分裂---染色體端粒丟失---至一定程度---DNA復(fù)制不進(jìn)行---停止分裂∴正常細(xì)胞---增殖潛能有限---若干代分裂后---有限細(xì)胞系瑞拉酶端粒的長(zhǎng)短腫瘤細(xì)胞與正常體細(xì)胞不同，瑞粒不隨分裂-變短保證此特殊-機(jī)制-端粒酶端粒酶可催化、合成并維持瑞粒一定的

8、長(zhǎng)度其激活可使細(xì)胞-無(wú)限增殖能力腫瘤細(xì)胞：端粒酶活性高端粒長(zhǎng)無(wú)限增殖自發(fā)性轉(zhuǎn)化:偶而,個(gè)別通過危機(jī)--轉(zhuǎn)化培養(yǎng)的細(xì)胞，由于尚不明確的原因---使培養(yǎng)的細(xì)胞發(fā)生自發(fā)的轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化細(xì)胞的性狀可傳遞給予代細(xì)胞來源細(xì)胞:2種可能轉(zhuǎn)化因素:種族來源正常細(xì)胞:人0;雞0;鼠較易9/11誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化誘導(dǎo)因素:化學(xué)、幅射、病毒等誘發(fā)培養(yǎng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化因素凡能改變DNA(基因)結(jié)構(gòu)的因素都可能成為