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《抗原抗體反應(yīng)的應(yīng)用免疫學(xué)導(dǎo)論ppt課件》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、抗原抗體反應(yīng)的應(yīng)用免疫學(xué)導(dǎo)論免疫沉淀和免疫凝集免疫沉淀和免疫凝集利用抗原與抗體特異性反應(yīng)的特性對抗原或抗體進行量或質(zhì)的測定分析是最經(jīng)典的血清學(xué)方法。溶液中的沉淀反應(yīng)在體外，當(dāng)抗體與相應(yīng)抗原二者濃度比例適當(dāng)時，會發(fā)生免疫沉淀反應(yīng)，可用于抗原或抗體的定性及定量分析。在液相中形成的沉淀不易觀察判斷，利用抗原和抗體溶液之間的界面形成的沉淀線便于判斷，即環(huán)狀沉淀試驗。環(huán)狀沉淀試驗原理將抗原溶液疊加在細(xì)小玻璃管中抗體溶液上面，抗原與抗體在兩液交界面處特異性結(jié)合，形成白色沉淀環(huán)?！驹u價】：簡便快速只能定性敏感性低方法：將適當(dāng)濃度的抗體混于瓊脂（0.8%~1%）中，瓊脂凝固后
2、，打成小孔，加入抗原，抗原由小孔開始向周圍擴散，并在小孔周圍合適的位置形成沉淀。沉淀環(huán)大小與抗原濃度呈正相關(guān)。單向免疫擴散?影響因素1.抗原分子量：與擴散速度、沉淀環(huán)反相關(guān)2.抗體種類：兔抗血清優(yōu)于馬、羊3.抗體稀釋度：抗體濃度大沉淀環(huán)小4.擴散時間：抗原含量高，擴散時間長5.擴散溫度：4～37℃內(nèi)溫度與擴散速度正相關(guān)6.瓊脂板厚度：與沉淀環(huán)反相關(guān)雙向免疫擴散【原理】：將可溶性抗原和抗體置于瓊脂凝膠板的對應(yīng)孔中，兩者各自在凝膠中向四周自由擴散，當(dāng)抗原與抗體相遇，在比例合適時形成沉淀線。染色標(biāo)本圖1.抗原抗體雙向自由擴散2.24小時出結(jié)果3.呈現(xiàn)沉淀線或弧模擬圖
3、結(jié)果分析：抗原或抗體是否存在；抗原或抗體的純度：若在兩孔內(nèi)有兩對或兩對以上的抗原抗體系統(tǒng)，就能產(chǎn)生相應(yīng)數(shù)量的分離的沉淀線?？乖蚩贵w相對濃度：抗原濃度越高，形成的沉淀線距離抗原孔越遠(yuǎn)，抗體濃度越高，形成的沉淀線距抗體孔越遠(yuǎn)；抗原或抗體相對分子量：抗原或抗體在瓊脂內(nèi)的擴散受分子量影響，分子量大者擴散速度慢，擴散圈小，局部濃度高，因此形成的沉淀圈彎向分子量大的一方，若二者分子量相等，則沉淀線呈直線；抗原性質(zhì)：觀察兩個鄰近孔的抗原與抗體所形成的兩條線是交叉抑或相連，可用來判斷該兩抗原是否有共同成分。同樣的純抗原a放在兩個鄰近的孔中，對應(yīng)抗體放在中央孔中，兩條沉淀線在
4、其相鄰的末端會互相連接和融合；若兩個不同的抗原a和b，則兩線互相交叉；若兩個抗原有部分相同成分a和ab，則兩線除有相連部分以外還有一伸出部分。滴定抗體效價：固定抗原濃度，稀釋抗體，出現(xiàn)沉淀線的最高稀釋度為該抗體的效價?？乖⒖贵w相對分子量Ag分子量大于AbAb分子量大于AgAg分子量等于Ab抗原決定簇部分相同抗原決定簇完全相同抗原性質(zhì)分析兩個抗原的抗原決定簇完全不同雙向瓊脂擴散試驗的應(yīng)用1.檢測未知抗原或抗體2.抗原性質(zhì)分析3.抗體效價滴定4.抗原或抗體純度鑒定電泳條件下的沉淀反應(yīng)免疫電泳是利用蛋白質(zhì)在凝膠中電泳遷移率不同能被分離的特性與免疫擴散結(jié)合進行分析的
5、方法。原理：混合的蛋白質(zhì)抗原在ＰＨ８．６時帶負(fù)電荷，在電場的作用下，由負(fù)極向正極遷移，使混合的抗原組分得以分離?？贵w可以通過自由擴散，也可以通過電泳與分離的抗原形成相應(yīng)的特異性沉淀線，從而提高免疫沉淀的靈敏度。常用的免疫方法有：血清免疫電泳、火箭電泳和對流免疫電泳血清免疫電泳將患者血清和正常人血清分別放在凝膠上近負(fù)極端的小孔中進行電泳分離后，在兩中抗原之間沿電泳方向挖一條平行的小槽，加入抗血清進行雙擴散。-+免疫電泳示意圖根據(jù)沉淀線的位置及粗細(xì)，可分析樣品中的抗原含量；根據(jù)蛋白質(zhì)的電泳遷移率，免疫特性及其它特性，可以確定該復(fù)合物中含有某種蛋白質(zhì)?；鸺娪緦蜗?/p>
6、免疫擴散和電泳相結(jié)合的一種定量檢測技術(shù)。原理：電泳時，含于瓊脂凝膠中的抗體不發(fā)生移動，而在電場的作用下促使樣品中的抗原向正極泳動。當(dāng)抗原與抗體分子達(dá)到適當(dāng)比例時，形成一個形狀如火箭的不溶性免疫復(fù)合物沉淀峰，峰的高度與樣本中的抗原濃度呈正相關(guān)。注意要點：選擇無電滲或電滲很小的瓊脂糖，否則火箭形狀不規(guī)則；若火箭頂部形狀呈不清晰的云霧狀，提示電泳時間不夠，未到達(dá)終點；作IgG定量時，由于瓊脂中的抗IgG抗體也是IgG，免疫反應(yīng)中的抗原抗體性質(zhì)相同，由于電滲作用影響了待測IgG的泳動，火箭峰呈紡錘狀。為了抵消電滲作用，可用甲醛使樣本IgG上的氨基甲?；?，使本來帶兩性電
7、荷的IgG只帶負(fù)電荷，加快泳動速度，出現(xiàn)伸向陽極的火箭峰。火箭電泳的檢測靈敏度在μg/ml水平?？刹捎酶偁幏ǚ派渥燥@影技術(shù)來進行火箭免疫電泳，靈敏度可達(dá)ng/ml。對流免疫電泳在pH8.6的瓊脂凝膠中，大部分蛋白質(zhì)抗原在堿性溶液中帶負(fù)電荷，且分子較小，電泳時，泳向正極?？贵w帶弱負(fù)電荷，但分子量大，電泳力小于電滲力，泳向負(fù)極?？乖涂贵w相遇，比例合適時形成肉眼可見的沉淀線。AgAb-+1.Ag陽性2.Ag弱陽性3.Ag強陽性4.Ag強陽性對流免疫電泳示意圖免疫共沉淀在溶液中兩種或兩種以上蛋白質(zhì)相互作用，可以通過免疫共沉淀驚醒鑒定和分離。蛋白質(zhì)相互作用通過非共價結(jié)
8、合，用針對其中一種蛋白質(zhì)的特異性抗體進
