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1、抗原抗體反應(yīng)的應(yīng)用免疫學(xué)導(dǎo)論免疫沉淀和免疫凝集免疫沉淀和免疫凝集利用抗原與抗體特異性反應(yīng)的特性對(duì)抗原或抗體進(jìn)行量或質(zhì)的測(cè)定分析是最經(jīng)典的血清學(xué)方法。溶液中的沉淀反應(yīng)在體外，當(dāng)抗體與相應(yīng)抗原二者濃度比例適當(dāng)時(shí)，會(huì)發(fā)生免疫沉淀反應(yīng)，可用于抗原或抗體的定性及定量分析。在液相中形成的沉淀不易觀察判斷，利用抗原和抗體溶液之間的界面形成的沉淀線便于判斷，即環(huán)狀沉淀試驗(yàn)。環(huán)狀沉淀試驗(yàn)原理將抗原溶液疊加在細(xì)小玻璃管中抗體溶液上面，抗原與抗體在兩液交界面處特異性結(jié)合，形成白色沉淀環(huán)?！驹u(píng)價(jià)】：簡(jiǎn)便快速只能定性敏感性低凝膠中沉淀反應(yīng)抗原分子和抗體分子在凝膠介質(zhì)中自由擴(kuò)散形成梯度
2、濃度，抗原與抗體在比例合適的一定擴(kuò)散部位相遇形成沉淀線?？捎糜跍y(cè)定抗原與抗體的相對(duì)濃度，也可用于比較不同抗原的特異性、純度及相互關(guān)系。主要有兩種方法：?jiǎn)蜗蛎庖邤U(kuò)散、雙向免疫擴(kuò)散單向免疫擴(kuò)散基本原理待測(cè)抗原從局部含有相應(yīng)定量抗體的凝膠內(nèi)自由向周圍擴(kuò)散，抗原抗體特異性結(jié)合，在二者比例合適的部位，形成白色沉淀環(huán)，沉淀環(huán)大小與抗原的濃度成正相關(guān)。方法：將適當(dāng)濃度的抗體混于瓊脂（0.8%~1%）中，瓊脂凝固后，打成小孔，加入抗原，抗原由小孔開(kāi)始向周圍擴(kuò)散，并在小孔周圍合適的位置形成沉淀。沉淀環(huán)大小與抗原濃度呈正相關(guān)。單向免疫擴(kuò)散?影響因素1.抗原分子量：與擴(kuò)散速度、沉
3、淀環(huán)反相關(guān)2.抗體種類：兔抗血清優(yōu)于馬、羊3.抗體稀釋度：抗體濃度大沉淀環(huán)小4.擴(kuò)散時(shí)間：抗原含量高，擴(kuò)散時(shí)間長(zhǎng)5.擴(kuò)散溫度：4～37℃內(nèi)溫度與擴(kuò)散速度正相關(guān)6.瓊脂板厚度：與沉淀環(huán)反相關(guān)雙向免疫擴(kuò)散【原理】：將可溶性抗原和抗體置于瓊脂凝膠板的對(duì)應(yīng)孔中，兩者各自在凝膠中向四周自由擴(kuò)散，當(dāng)抗原與抗體相遇，在比例合適時(shí)形成沉淀線。染色標(biāo)本圖1.抗原抗體雙向自由擴(kuò)散2.24小時(shí)出結(jié)果3.呈現(xiàn)沉淀線或弧模擬圖結(jié)果分析：抗原或抗體是否存在；抗原或抗體的純度：若在兩孔內(nèi)有兩對(duì)或兩對(duì)以上的抗原抗體系統(tǒng)，就能產(chǎn)生相應(yīng)數(shù)量的分離的沉淀線。抗原或抗體相對(duì)濃度：抗原濃度越高，形成
4、的沉淀線距離抗原孔越遠(yuǎn)，抗體濃度越高，形成的沉淀線距抗體孔越遠(yuǎn)；抗原或抗體相對(duì)分子量：抗原或抗體在瓊脂內(nèi)的擴(kuò)散受分子量影響，分子量大者擴(kuò)散速度慢，擴(kuò)散圈小，局部濃度高，因此形成的沉淀圈彎向分子量大的一方，若二者分子量相等，則沉淀線呈直線；抗原性質(zhì)：觀察兩個(gè)鄰近孔的抗原與抗體所形成的兩條線是交叉抑或相連，可用來(lái)判斷該兩抗原是否有共同成分。同樣的純抗原a放在兩個(gè)鄰近的孔中，對(duì)應(yīng)抗體放在中央孔中，兩條沉淀線在其相鄰的末端會(huì)互相連接和融合；若兩個(gè)不同的抗原a和b，則兩線互相交叉；若兩個(gè)抗原有部分相同成分a和ab，則兩線除有相連部分以外還有一伸出部分。滴定抗體效價(jià)：固
5、定抗原濃度，稀釋抗體，出現(xiàn)沉淀線的最高稀釋度為該抗體的效價(jià)。抗原、抗體相對(duì)分子量Ag分子量大于AbAb分子量大于AgAg分子量等于Ab抗原決定簇部分相同抗原決定簇完全相同抗原性質(zhì)分析兩個(gè)抗原的抗原決定簇完全不同雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)的應(yīng)用1.檢測(cè)未知抗原或抗體2.抗原性質(zhì)分析3.抗體效價(jià)滴定4.抗原或抗體純度鑒定電泳條件下的沉淀反應(yīng)免疫電泳是利用蛋白質(zhì)在凝膠中電泳遷移率不同能被分離的特性與免疫擴(kuò)散結(jié)合進(jìn)行分析的方法。原理：混合的蛋白質(zhì)抗原在ＰＨ８．６時(shí)帶負(fù)電荷，在電場(chǎng)的作用下，由負(fù)極向正極遷移，使混合的抗原組分得以分離?？贵w可以通過(guò)自由擴(kuò)散，也可以通過(guò)電泳與分離的
6、抗原形成相應(yīng)的特異性沉淀線，從而提高免疫沉淀的靈敏度。常用的免疫方法有：血清免疫電泳、火箭電泳和對(duì)流免疫電泳血清免疫電泳將患者血清和正常人血清分別放在凝膠上近負(fù)極端的小孔中進(jìn)行電泳分離后，在兩中抗原之間沿電泳方向挖一條平行的小槽，加入抗血清進(jìn)行雙擴(kuò)散。-+免疫電泳示意圖根據(jù)沉淀線的位置及粗細(xì)，可分析樣品中的抗原含量；根據(jù)蛋白質(zhì)的電泳遷移率，免疫特性及其它特性，可以確定該復(fù)合物中含有某種蛋白質(zhì)?；鸺娪緦蜗蛎庖邤U(kuò)散和電泳相結(jié)合的一種定量檢測(cè)技術(shù)。原理：電泳時(shí)，含于瓊脂凝膠中的抗體不發(fā)生移動(dòng)，而在電場(chǎng)的作用下促使樣品中的抗原向正極泳動(dòng)。當(dāng)抗原與抗體分子達(dá)到適當(dāng)
7、比例時(shí)，形成一個(gè)形狀如火箭的不溶性免疫復(fù)合物沉淀峰，峰的高度與樣本中的抗原濃度呈正相關(guān)。注意要點(diǎn)：選擇無(wú)電滲或電滲很小的瓊脂糖，否則火箭形狀不規(guī)則；若火箭頂部形狀呈不清晰的云霧狀，提示電泳時(shí)間不夠，未到達(dá)終點(diǎn)；作IgG定量時(shí)，由于瓊脂中的抗IgG抗體也是IgG，免疫反應(yīng)中的抗原抗體性質(zhì)相同，由于電滲作用影響了待測(cè)IgG的泳動(dòng)，火箭峰呈紡錘狀。為了抵消電滲作用，可用甲醛使樣本IgG上的氨基甲?；?，使本來(lái)帶兩性電荷的IgG只帶負(fù)電荷，加快泳動(dòng)速度，出現(xiàn)伸向陽(yáng)極的火箭峰?；鸺娪镜臋z測(cè)靈敏度在μg/ml水平?？刹捎酶?jìng)爭(zhēng)法放射自顯影技術(shù)來(lái)進(jìn)行火箭免疫電泳，靈敏度可達(dá)
8、ng/ml。對(duì)流免疫電泳在pH8.6的瓊脂凝膠中，大
