布病病原學(xué)及血清學(xué)

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1、布病病原學(xué)及實(shí)驗(yàn)室診斷陜西省疾病預(yù)防控制中心陳寶寶123布氏菌的生物學(xué)特性布氏菌的抗原及毒力布病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)主要內(nèi)容1布魯氏菌的生物學(xué)特性發(fā)現(xiàn)和分類位置31.1抵抗力31.3形態(tài)和培養(yǎng)特征1.21.1布氏菌的發(fā)現(xiàn)及分類布魯氏菌病（Brucellosis）是由布魯氏菌屬（Brucella）的細(xì)菌侵入機(jī)體，引起的傳染－變態(tài)反應(yīng)性人畜共患傳染病，簡(jiǎn)稱布病。1887年英國(guó)軍醫(yī)Bruce首先從死于“馬耳他熱”的英國(guó)士兵的脾臟中分離出羊種布氏菌。微生物分類學(xué)家將布氏菌歸為布魯氏菌屬，下分6個(gè)種19個(gè)生物型：羊種布氏菌（Bvr.melitensis）1，2，3型；牛種布氏菌（Br.abortus）1，2

2、，3，4，5，6，7，9型；豬種布氏菌（Br.suis）1，2，3，4，5型；沙林鼠種布氏菌（Br.neotemae）；綿羊附睪種布氏菌（Br.ovis）；犬種布氏菌（Br.canis）2013年，我省共分離出3株布魯氏菌，均為羊3型；1991年以前流行優(yōu)勢(shì)種型為羊1、2型，1996年后則為羊1、3型。陜西省是以羊型菌為主，牛、犬種布魯氏菌病的混合疫區(qū)，流行優(yōu)勢(shì)種隨時(shí)間推移發(fā)生了變化。1.2形態(tài)和培養(yǎng)特征布氏菌屬細(xì)菌是一組微小的球桿狀革蘭氏陰性菌，寬0.3～0.6μm，長(zhǎng)0.6～1.5μm，可被所有的堿性染料所著色，吉姆薩染色成紫紅色；無(wú)芽孢、無(wú)鞭毛、無(wú)質(zhì)粒、不形成莢膜。一般說(shuō)來(lái)，羊種菌

3、最小，牛種菌次之，豬種菌最大。鑒定布魯氏菌的染色方法是：A:革蘭氏染色B:復(fù)紅染色C:亞甲藍(lán)染色D:吉姆薩染色E:柯茲洛夫染色柯茲羅夫斯基提出用0.5%沙黃水溶液染色，加熱至出現(xiàn)水泡，水洗后用0.5%孔雀綠或1%煌綠或1%亞甲蘭水溶液復(fù)染1分鐘，布氏菌染成紅色，其他細(xì)菌染成綠色或藍(lán)色。營(yíng)養(yǎng)條件高，生長(zhǎng)緩慢，生長(zhǎng)所需溫度為20-40℃，最適溫度為37℃.通常要經(jīng)過(guò)4-6天，有的甚至要經(jīng)過(guò)20-30天（雙相培養(yǎng)基）才能長(zhǎng)出菌落。1.3抵抗力對(duì)物理因子的抵抗力對(duì)化學(xué)因子的抵抗力不同環(huán)境中的抵抗能力對(duì)抗生素的敏感性不同溫度對(duì)布魯氏菌影響對(duì)物理因子的抵抗力布魯氏菌對(duì)消毒劑的抵抗能力對(duì)化學(xué)因子的抵抗

4、力不同環(huán)境中的抵抗能力現(xiàn)已證明，布魯氏菌對(duì)四環(huán)素最敏感，其次是鏈霉素，而對(duì)枯草桿菌肽、多黏菌素B、多黏菌素M素等有很強(qiáng)的抵抗力。對(duì)抗生素的敏感性布氏菌的抗原、內(nèi)毒素32.1布氏菌的毒力2.22布氏菌的抗原、毒力布氏菌的抗原成分十分復(fù)雜，存在A、M、G成分。A抗原對(duì)牛種布氏菌有特異性，M抗原對(duì)羊種布氏菌有特異性，G為兩種菌共有。與多種細(xì)菌存在共同抗原，因而有血清交叉反應(yīng)。布氏菌不產(chǎn)生外毒素，只產(chǎn)生內(nèi)毒素，有致熱、致炎作用，可導(dǎo)致休克。2.1布氏菌的抗原及內(nèi)毒素從種上來(lái)說(shuō)，羊種毒力最強(qiáng)，豬種和牛種次之，犬種的毒力很弱，幾乎不引起人致病。由于菌種毒力等因素的不同，患病后的臨床表現(xiàn)也不完全一樣。

5、羊種布魯氏菌患者中毒癥狀嚴(yán)重，多有典型的發(fā)燒、多汗、頭痛、虛弱、關(guān)節(jié)痛、肝脾及睪丸腫大等急性癥狀。2.2布氏菌的毒力2.3布病發(fā)病過(guò)程細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)33.1血清學(xué)檢驗(yàn)3.23.布氏菌的實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室要求：布氏菌是高致病性病原微生物，從危害程度來(lái)說(shuō)為第二類病原微生物。布氏菌的分離培養(yǎng)要在生物安全二級(jí)以上實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。培養(yǎng)樣品采集培養(yǎng)菌株鑒定種型鑒定細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)33.13.1.1布氏菌培養(yǎng)檢查材料：人或動(dòng)物的全血?jiǎng)游锪鳟a(chǎn)胎兒（胎兒的肝臟、肺、胃內(nèi)容物）動(dòng)物臟器、動(dòng)物胎盤、關(guān)節(jié)液、陰道分泌物等新鮮乳汁3.1.2雙相血培養(yǎng)瓶采集對(duì)象：對(duì)急性期和慢性活動(dòng)期病人未用藥前進(jìn)行血液采集。采樣方法：1.使培養(yǎng)

6、瓶恢復(fù)至室溫、編號(hào)；2.去掉培養(yǎng)瓶的保護(hù)帽，用酒精或碘消毒瓶塞；3.用注射器無(wú)菌靜脈穿刺采集血液5mL，注入血培養(yǎng)瓶；4.再次消毒瓶塞和保護(hù)帽，蓋好保護(hù)帽；5.從一側(cè)到一側(cè)傾斜培養(yǎng)瓶數(shù)次，混勻血液和肉湯。雙相血培養(yǎng)瓶培養(yǎng)方法1.將瓶子水平放置用肉湯沖洗瓊脂5-10分鐘以接種瓊脂；2.37℃直立培養(yǎng)。每隔一天觀察一次結(jié)果，如未長(zhǎng)菌，可通過(guò)沖洗再接種一次。30天未出菌，可定為陰性，其血培養(yǎng)瓶經(jīng)高壓滅菌處理；3.培養(yǎng)后觀察肉湯和瓊脂：出現(xiàn)下列一種或更多現(xiàn)象者為陽(yáng)性結(jié)果：瓊脂上：出現(xiàn)菌落或產(chǎn)生氣體。肉湯中：出現(xiàn)渾濁、沉淀或溶血。3.1.3布氏菌培養(yǎng)特性生長(zhǎng)緩慢，延滯期長(zhǎng)，尤其初代分離需氧或微需氧

7、菌，PH7.2，牛種部分型別、綿羊附睪種布氏菌需在5-10%CO2環(huán)境中培養(yǎng)菌落無(wú)色透明，光滑圓形，突起，均質(zhì)，直徑1-2mm液體培養(yǎng)均勻混濁，無(wú)菌膜粗糙型菌落較大，生長(zhǎng)快3.1.4分離培養(yǎng)基商用培養(yǎng)基：布氏瓊脂布氏肉湯制備培養(yǎng)基：肝浸液瓊脂血瓊脂培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基胰蛋白眎瓊脂培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基：抗菌素和染料選擇性培養(yǎng)基桿菌肽放線菌酮制霉菌素布氏菌特異的油滴樣菌落布氏瓊脂布魯氏菌菌落血平皿布氏菌菌落布氏菌革蘭氏染色3.1.5布氏菌菌