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1、缺血后處理對大鼠腸缺血：褚薇薇，武步強，沙煥臣，王殿華【摘要】目的探討缺血后處理對大鼠腸缺血-再灌注損傷腸黏膜細胞線粒體的影響。方法SD大鼠32只隨機分為4組(n=8)：假手術(S)組、缺血-再灌注(I/R)組、缺血預處理(IPC)組、缺血后處理(I-post)組。應用透射電子顯微鏡、四甲基偶氮唑藍(MTT)比色法、激光共聚焦掃描顯微鏡分別觀測各組大鼠腸黏膜細胞線粒體的形態(tài)結構、呼吸功能以及線粒體跨膜電位的變化。結果與I/R組相比，I-post組和IPC組大鼠腸黏膜細胞線粒體形態(tài)結構改變明顯減輕，線粒體呼吸功能和線粒體跨膜電位明
2、顯升高(P<0.05)；I-post組與IPC組相比，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結論缺血后處理抗大鼠腸缺血-再灌注損傷的作用機制可能與改善腸黏膜細胞線粒體的形態(tài)結構和呼吸功能及提高線粒體跨膜電位有關?！娟P鍵詞】缺血-再灌注；缺血后處理；缺血預處理；線粒體；腸黏膜 ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatetheeffectsofischemicpostconditioning(I-post)onintestinalmucosamitochondrionafterischemia-repe
3、rfusion(I/R)injuryinratintestine.MethodsByusingratmodelofintestineI/Rinjury,maleSprague-Da-operationgroup(S),I/Rgroup(I/R),ischemicpreconditioninggroup(IPC),andI-postgroup.Intestinalmucosamitochondrialultrastructuralchangesissionelectronmicroscope(TEM).Mucosalcellula
4、rmitochondrialrespirationfunctioneasuringthemitochondrialdehydrogenase-dependentreductionofMTTtoitsformazanderivative,andintestinalmucosalmitochondrialmembranepotentialicroscopy.ResultspareditochondrioninI-postgroupandIPCgroupbegantorecover.Themitochondrialrespirator
5、yfunctionandthemitochondrialmembranepotentialprovedinI-postgroupandIPCgroup(P<0.05).ThereechanismofischemicpostconditioningagainstI/Rinjuryofintestineinratsispartlyrelatedtomaintainingthemitochondrialultrastructuralchangesandrespiratoryfunctionandimprovingmitochon
6、drialmembranepotential. KEYTT)購自美國Sigma公司；線粒體跨膜電位檢測試劑盒(JC-1)由碧云天生物技術研究所提供。激光共聚焦掃描系統(tǒng)(德國，型號MCR-1024ES)；透射電子顯微鏡(日本，型號JEM-011)?！ ?.2實驗動物 健康雄性Sprague-Da進腹，用溫鹽水紗布將腸管推向左側腹腔，暴露右腎內上方的腸系膜根部，找到腸系膜上動脈(superiormesentericartery,SMA)，在其根部用無創(chuàng)傷血管夾夾閉阻斷SMA血運45min，造成腸缺血模型，然后松夾，再灌注1h后
7、經頸動脈放血處死?！ ?.2.2動物分組及處理 動物隨機分為4組(n=8)：①假手術(S)組：僅行開腹，分離SMA不夾閉；②缺血-再灌注(I/R)組：方法見模型復制；③缺血預處理(IPC)組：夾閉SMA5min和松夾5min作為預處理，2個循環(huán)，余同I/R組；④缺血后處理(I-post)組：缺血45min后即刻行3個循環(huán)的灌注30s/阻斷30s，余同I/R組。 1.3標本收集 于再灌注1h時處死各組大鼠，迅速取距回盲部2cm的小腸組織90cm，分離大鼠腸黏膜細胞的方法參考文獻［6］。另取1cm小腸組織浸泡于3.5%(體積分
8、數(shù))戊二醛溶液(4℃保存)中待作透射電子顯微鏡觀察?！ ?.4觀察項目 ?、偻干潆娮语@微鏡下觀察腸黏膜細胞線粒體形態(tài)結構的改變；②MTT比色法檢測大鼠腸黏膜細胞線粒體的呼吸功能；③激光共聚焦掃描顯微鏡檢測各組大鼠腸黏膜細胞線粒體跨膜電位的變化。嚴格按照試劑盒說明
