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《植物乳桿菌組胺分解酶的分離純化及性質(zhì)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、分類號(hào)：TS205學(xué)號(hào)：201500370051碩士學(xué)位論文植物乳桿菌組胺分解酶的分離純化及性質(zhì)研究PurificationandCharacterizationofAnEnzymeCapableofHistamineDegradationFromLactobacillusplantarum研究生姓名：張沁芳指導(dǎo)教師：趙玉平教授孫舒揚(yáng)副教授學(xué)科門類：農(nóng)學(xué)專業(yè)名稱：農(nóng)產(chǎn)品加工及貯藏工程論文提交日期：2018年4月1日IIII摘要生物胺是果酒釀造過(guò)程中產(chǎn)生的一類不良代謝產(chǎn)物，以組胺為典型代表，給果酒的生產(chǎn)帶來(lái)了隱患。植物乳桿
2、菌（Lactobacillusplantarum）能夠有效降解組胺，在果酒，特別是葡萄酒中有推廣應(yīng)用的巨大潛力。鑒于目前有關(guān)L.plantarum產(chǎn)組胺分解酶的觀點(diǎn)出現(xiàn)了學(xué)術(shù)分歧，獲得L.plantarum表達(dá)的組胺分解酶，揭示其化學(xué)本質(zhì)，是目前迫切需要解決的問(wèn)題。為此，本研究自主篩選能夠降解組胺的植物乳桿菌，并且以之為始發(fā)菌株，分離純化獲得組胺分解酶純品，并研究了酶的相關(guān)性質(zhì)。主要研究結(jié)果如下：1.獲得兼具組胺降解和有機(jī)酸降解能力的多功能乳酸菌株。通過(guò)自主篩選，從全國(guó)多個(gè)葡萄酒產(chǎn)區(qū)共篩選獲得了346株乳酸菌，其中具有生
3、物胺降解能力的有39株。再通過(guò)生物降酸能力和耐受能力（低pH、高酒精度、高SO2濃度）篩查，選出了一株性能卓越的多功能菌株。經(jīng)生理生化特性鑒定和分子生物學(xué)鑒定，確認(rèn)其是一株植物乳桿菌，命名為L(zhǎng).plantarumSGJ-24。2.對(duì)L.plantarumSGJ-24組胺分解酶進(jìn)行了分離純化，獲得了電泳純蛋白。通過(guò)測(cè)定細(xì)胞全液、細(xì)胞外液和細(xì)胞內(nèi)液的酶活力，發(fā)現(xiàn)該酶主要存在于細(xì)胞內(nèi)部，同時(shí)也確定了最佳破碎條件—5s/5s10min。經(jīng)過(guò)硫酸銨沉淀（最佳飽和度70%）、DEAE陰離子交換層析和Superdex75凝膠過(guò)濾層析，
4、得到了組胺分解酶純酶，測(cè)得其分子量約為36kDa。3．解析L.plantarumSGJ-24組胺分解酶的生化特征和酶學(xué)性質(zhì)。研究?jī)?nèi)容包括N-末端氨基酸分析、pH和溫度對(duì)組胺分解酶活力性及穩(wěn)定性的影響、金屬離子和抑制劑對(duì)酶活力的影響。得到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果為：組胺分解酶的N-端序列為絲-纈-賴-異亮-甘-異亮-天冬-甘-苯丙-甘-精-異亮-甘-精-亮；經(jīng)過(guò)BLAST蛋白比對(duì)，確認(rèn)該酶為3-磷酸甘油醛脫氫酶；最適反應(yīng)溫度為40℃，在55℃以下較為穩(wěn)定，具有較寬的耐熱范圍；最適pH為7.5，在pH6.5~pH8.5的條件下能夠穩(wěn)定存在
5、；二硫蘇糖醇（DTT）、2+乙二胺四乙酸（EDTA）、β-巰基乙醇和Mg抑制了酶活力，而十二烷基磺酸鈉（SDS）、2+3+++2+2+Fe、Fe、K、Na、Pb和Ca能夠激活該酶。關(guān)鍵詞：生物胺；植物乳桿菌；組胺分解酶；分離；純化IVAbstractBiogenicamines(BA)aretoxicmetabolitesthatareformedduringthewine-makingprocess.Lactobacillusplantarumhasgreatpotentialinfruitwine,especiall
6、ywinebecauseofitseffectivelydegradationofBA.However,thereareacademicdivergencesaboutthenatureoftheenzymecapableofbiogenicaminesdegradationexpressedbyLactobacillusplantarum.Therefore,itisanurgentproblemtoobtaintheenzymecapableofhistaminedegradationexpressedbyLacto
7、bacillusplantarumandrevealitschemicalnature.Therefore,thisstudyindependentlyscreenedLactobacillusplantarumwhichcandegradebiogenicamines,anduseditastheinitialstraintoisolateandpurifytheenzymecapableofBAdegradationandstudythepropertiesoftheenzyme.Themainresultsarea
8、sfollows:（1）Amultifunctionallacticacidbacteriaswithbiogenicaminedegradationandorganicaciddegradationabilitywereobtained.Finally,atotalof346LABstrainswereobtain
