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1、護骨十五丸抗老年雌性大鼠骨質疏松的效果【摘要】目的評估藏藥護骨十五丸抗老年雌性大鼠骨質疏松的效果。方法50只雌性22月齡老年大鼠，分為藏藥護骨十五丸大、中、小劑量治療組，雌激素治療組及老年模型組，連續(xù)給藥50d；另6月齡大鼠12只作為青年對照組。觀察各組實驗大鼠骨形態(tài)、骨密度、骨生物力學的改變。結果22月齡雌性大鼠可作為骨質疏松的實驗模型；護骨十五丸大劑量治療組可顯著增加骨松質面積、骨皮質指數(shù)（30％，15％,P0.05），可顯著增加股骨骨密度、股骨的最大變形能力，減少骨鈣丟失。結論藏藥護骨十五丸對老齡雌性大鼠骨質疏松有顯著改善或阻止骨質疏松發(fā)展的作用，提示該制劑對女性絕經
2、后期骨質疏松癥具有預防和治療作用?！娟P鍵詞】骨質疏松；老年；雌性大鼠；護骨十五丸 骨質疏松癥(osteoporosis,OP)是骨骼骨基質和骨礦物質喪失所致的一種骨代謝性疾病，以骨顯微結構改變、單位骨體積骨量減少和骨生物力學改變?yōu)樘卣鳌?〕。世界上骨質疏松患者約達2億人，骨質疏松癥成為危害老年人健康的重大公共衛(wèi)生問題。目前骨質疏松癥的臨床治療多以西藥為主，如雌激素、降鈣素、鈣劑、維生素D、二磷酸類及氟化物等〔2〕，醫(yī)學上雖開發(fā)了較多抗骨質疏松藥物，但仍未成為主導療法〔3〕。祖國醫(yī)學是一個豐富的寶藏,對骨質疏松有豐富的論述，認為腎虛是腰腿痛的根本原因，藏藥護骨十五丸系杜仲、
3、續(xù)斷、乳香、沒藥、雪蓮花、西紅花等組成，有補腎壯腰、溫經活血之功效。本實驗主要觀察藏藥護骨十五丸治療老年雌性大鼠骨質疏松的效果，以期找到一種預防和治療骨質疏松的有效藥物?！ ?材料 1.1藥物 藏藥護骨十五丸系杜仲、續(xù)斷、乳香、沒藥、雪蓮花、西紅花等組成,本研究按動物實驗要求,取膠丸制備成供試藥物(自制)?！ ?.2動物健康 純種SD大鼠62只，雌性，其中22月齡50只，體重（330±14）g，6月齡大鼠12只，由西安交通大學動物中心提供（國家A級實驗動物）。全部大鼠飼養(yǎng)條件一致，自由攝食，喂以大鼠標準飼料（由西安交通大學動物中心提供），飲用蒸餾水?！ ?方法 2.
4、1老齡大鼠骨質疏松模型的選定 為能更確切模擬人類原發(fā)性骨質疏松癥的發(fā)生發(fā)展過程，本實驗采用老齡未曾生育大鼠作為實驗動物模型。50只老齡未經生育大鼠自然飼用常規(guī)飼料和蒸餾水22個月，作為老齡大鼠骨質疏松實驗模型?！ ?.2治療分組及治療時間 采用老齡大鼠實驗模型，隨機分為5組：大劑量治療組（A組，劑量：3.5g/kg，質量分數(shù)35%）10只；中劑量治療組（B組，劑量：1.5g/kg，質量分數(shù)15%）11只；小劑量治療組（C組，劑量0.5g/kg，質量分數(shù)5%）9只；無措施22月老年模型組〔D組，0.6g/kg,6.0%(g/g)乳劑〕9只；己烯雌酚組〔E組，0.04mg/
5、kg,0.4%（mg/g）乳劑〕11只；另6月齡大鼠12只作為青年對照組〔F組，0.6g/kg，6%（g/g）乳劑〕。其供試液溶劑大、中、小劑量組，老年模型組，己烯雌酚組，青年對照組均用伯洛沙姆制成6.0%(g/g)乳劑，治療期為50d?！ ?.3取材 實驗動物在20%烏拉坦溶液麻醉〔（0.5ml·100g-1）〕下,腹腔動脈抽血處死，取動物雙側后肢股骨、脛骨，分別固定于4%多聚甲醛中或放置于低溫冰箱固定和保存。備測骨鈣的股骨以紗布包裹后放置于低溫冰箱固定和保存?！ ?.4觀察指標與方法 2.4.1組織形態(tài)學觀察 取股骨上段中1/2段,經4%多聚甲醛固定，8％的中性E
6、DTA脫鈣液脫鈣40d，常規(guī)石蠟包埋，用9%的多聚賴氨酸處理載玻片，切片，每張6μm，伊紅—蘇木素染色。2.4.2骨形態(tài)學測量股骨的石蠟切片經HE染色后應用北航醫(yī)學半自動彩色圖像分析系統(tǒng)分析測量。以關節(jié)軟骨下1mm的松質骨區(qū)域，每張切片測量3個視野（放大倍數(shù)40×，測定面積限定為274753μm2），取平均值，測量骨小梁相對面積。 2.4.3骨皮質厚度指數(shù) 取股骨中部橫斷面HE染色切片，光學顯微鏡下測量計算骨皮質厚度指數(shù)。計算方法如下： 骨皮質厚度指數(shù)＝AB+CD/AD其中AB，CD，AD見圖1（4～8個部位處測量后求均值）?！ ?.4.4股骨鈣含量測定 取適量股骨
7、精密稱重,置消化罐中,加混合酸(HNO3∶HClO4=4∶1)3ml,密閉后置烤箱中105℃消化2h,消化液取不同稀釋度分析各元素含量。鈣(Ca)采用Z-8000型塞曼偏振原子吸收分光光度計分析。鈣元素分析過程中的質量控制用USEPA和粉質發(fā)樣進行質控，采取混合血樣控制。樣品處理過程中嘗試了灰化法、試管內混合酸消化法,最終選擇了密閉消化罐消化,并做了回收實驗,回收率97.4%～104.2%。 2.4.5骨礦密度(BMD)測定 用QDR-2000型HOLOJAC雙光子骨密度儀測量股骨骨礦密度,放射源為镅241Am
