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《探討雙抗原夾心法檢測hiv抗體的影響因素》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、探討雙抗原夾心法檢測HIV抗體的影響因素（廣丙省來賓市金秀縣人民醫(yī)院廣丙來賓545700）【摘要】目的：探討雙抗原夾心法檢測HIV抗體的影響因素。方法：以雙抗原夾心法對HIV抗體進行檢測，分析在不同血清、不同孵育方式、不同血清量、不同孵育時間及顯色終止后不同時間段比色對測定結(jié)果造成的影響。結(jié)果：對HIV抗體的影響因素主要括不同血清量、不同孵育時間及加終止液后不同時間段比色。結(jié)論：雙抗原夾心法檢測HIV抗體時的主要影響因素包括血清量減少、孵育時間縮短及加終止液后的比色時間延長等。【關(guān)鍵詞】雙抗原夾心法；HIV抗體；影響因素【中圖分類號】R37【文獻標(biāo)識碼】A
2、【文章編號】2095-1752（2016）01-0149-02艾滋病乂稱為獲得性免疫缺陷綜合征，該病由免疫缺陷病毒引起，臨床上以特異性HIV抗體診斷作為HIV感染的主要依據(jù)［1-2］。在木次調(diào)查中我院旨在重點分析雙抗原夾心法檢測HIV抗體的影響因素?，F(xiàn)報告如下。1.材料與方法1.1試劑與儀器試劑：HIV抗體第三代（雙抗原夾心法）診斷試劑盒，HIV抗體質(zhì)控血清，由北京萬泰有限公司生產(chǎn)提供。儀器：RT-6100酶標(biāo)分析儀，RT—300自動洗板機，Hwl型電熱恒溫水浴箱。1.2方法1.2.1樣品來源：陰性抗體來源于健康體檢者，陽性抗體來自于我市疾控中心，并經(jīng)滅活
3、處理。1.2.2非溶血、溶血稀釋樣品的制備：取HIV陰性樣品，處理后分離非溶血血清與溶血血清，后用該血清對HIV抗體陽性血清進行倍比稀釋，測定溶血樣品Hb濃度，同時對非溶血樣品與溶血樣品的相關(guān)情況進行比較。1.2.3非脂濁、脂濁稀釋樣品的制備：取HIV陰性樣品，處理后得到非脂濁、脂濁血清，后用該血清對HIV抗體陽性血清進行倍比稀釋，測定各樣品TG含量，同時對非脂濁、脂濁稀釋樣品的相關(guān)情況進行比較。1.2.4HIV抗體陽性樣品的制備：取若干HIV陰性樣品，離心分離血清，后于各血清內(nèi)加入不同量的HIV抗體陽性血清，稀釋成不同濃度的HIV抗體陽性樣品。對各樣品進
4、行不同方式的孵育、不同血清量比較、不同孵育吋間比較與顯色終止后不同吋間段比色比較。1.3統(tǒng)計學(xué)處理本次所得數(shù)據(jù)以SPSS14.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行分析處理，計數(shù)資料采用卡方檢驗，計量資料采用均數(shù)_+標(biāo)準(zhǔn)差表示，以P<0.05差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。1.結(jié)果2.1非溶血樣品與溶血樣品比較由結(jié)果可知，非溶血樣品與溶血樣品倍比稀釋后的HIV抗體A值配對t檢驗比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P〉0.05）。2.2非脂濁與脂濁樣品的比較由結(jié)果可知，非脂濁與脂濁樣品倍比稀釋后的HIV抗體A值配對t檢驗比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P〉0.05）。2.3不同孵育方式對HIV抗體檢測的影響選
5、取12份HIV抗體陽性樣品，每份平行測定2孔。其中一份經(jīng)水浴箱內(nèi)培養(yǎng)，另一份經(jīng)培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，兩組樣品蘇余各培養(yǎng)條件均相冋。由結(jié)果可知，兩組A值配對t檢驗比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P〉0.05）。2.4不同血清量和不同孵育時間對HIV抗體檢測的影響選取30份HIV抗體陽性樣品，每份平行測定2孔。一組（正常組）血清100μl,孵育30min,一組（對比1組）血清50μl,孵育30min;一組（對比2組）血清100μl,孵育20min。三組樣品其余培養(yǎng)條件均相同，由結(jié)果可知，正常組與對比1組進行A值配對t檢驗比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),正
6、常組與對比2組進行A值配對t檢驗比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05>。2.5加終止液后不同時間段比色A值比較挑選出A值在0.074?3.001之間的樣品60份，加入終止液后在不冋吋間段比色，進行A值測定，配對t檢驗，由結(jié)果可知，立即比色與比色5min比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P〉0.05)，其余l(xiāng)Omin、15min、20min、25min、30min比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。1.討論在本次調(diào)査中，溶血實驗對結(jié)果造成的影響主要在于紅細(xì)胞溶血后，其所釋放的游離Hb具奮過氧化物酶的活性，可吸附于反應(yīng)孔上，進而使得檢驗結(jié)果呈假陽性。在抗體陽性非溶血與溶血
7、稀釋樣品中，當(dāng)其比例為1:32時，A值并未出現(xiàn)明顯變化，這可能因酶標(biāo)反應(yīng)板孔包被物的濃度是一個相對的定值冇關(guān)。脂濁對實驗結(jié)果造成的影響主要在于脂濁可增大血清黏度，減慢分子運動速度，進而使得抗原抗體結(jié)合幾率減慢，干擾測定結(jié)果。本次調(diào)查提示，一定程度的脂濁對檢驗結(jié)果未造成明顯影響。不同孵育方式也未對結(jié)果造成顯著影響，其主要因為抗原抗體反應(yīng)在一定吋間與溫度下可達到反應(yīng)平衡點，但筆者仍建議行水浴孵育，以保證反應(yīng)溫度達到平衡狀態(tài)。結(jié)果顯示血清量的多少及孵育吋間長短可對檢驗結(jié)果造成較人影響。其中血清量減少或溫育吋間降低均可降低A值。由本次調(diào)查結(jié)果可知，加入終止液后，避
8、光保存反應(yīng)板可減慢A值下降速度，因此在實驗過程中需對蘇進行特殊保存
